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泪流满面请教各位大侠凝胶色谱中流动相加盐的目的和原理
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本人凝胶色谱新手，在做一个项目，需要用凝胶色谱。美国药典论坛上已有方法，重复了人家方法发现有些地方不对，撇开这些不谈，先说说我的疑问吧！ 1 美国药典上的流动相加了0.1M的硝酸钾，我试了一针加的，一针不加的，发现不加盐峰会前沿，加盐的峰很对称，请问在凝胶色谱里加盐的目的除了改善峰形还有什么作用吗？我更好奇的是盐是通过什么原理来改善峰形的？ 2 还有一个很奇怪的现象，我的样品和两个杂质出峰时间重叠，即专属性不合格，这三种物质虽然都是钠盐，但大家请注意样品的分子量范围是1000-2000，而两个杂质的分子量一个是100多，一个是300多，就是说在分离原理为分子排阻的凝胶色谱里，分子量1000多的和100,300的一起出峰，改变流动相（换过纯水，也试过加大有机相比例）变化并不明显，这是为什么呢？难道现在的凝胶色谱已经不是单纯的分子排阻原理了，还是说样品的出峰时间除了和分子量有关，还和他们的水溶性有关？ 3 还有一个现象我不能理解，就是走空白，也就是流动相的时候会出现一些溶剂峰，走样品的时候也会出现溶剂峰，但是样品中的溶剂峰的响应要比溶剂峰里的高多了，这是怎么回事呢？ 这几个问题快把我折磨疯了，请高手解答！！ [ Last edited by xiaoxin2809 on 2012-2-28 at 06:55 ] |
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