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Shoney

木虫 (著名写手)

[求助] HEPES缓冲液pH=6.0?

自己配的HEPES缓冲液,成分为NaCl(0.145mol/L),KCl(0.0033mol/L)和HEPES(0.02mol/L),用pH计测得其pH值居然是6.0,是不是HEPES变质了?
ps:pH计是好的
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
Shoney(金币+1): 谢谢应助 2012-03-05 18:47:36
HEPES缓冲范围是pH6.8-8.2。当然这是在用NaOH进行酸度调节的情况下的。温度也是有影响的。
2楼2012-03-01 10:45:25
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Shoney

木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by dshlove at 2012-03-01 10:45:25:
HEPES缓冲范围是pH6.8-8.2。当然这是在用NaOH进行酸度调节的情况下的。温度也是有影响的。

也就是说我的溶液没有问题,只是需要用NaOH来调节pH值?
3楼2012-03-02 09:51:22
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dshlove

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Shoney at 2012-03-02 09:51:22:
也就是说我的溶液没有问题,只是需要用NaOH来调节pH值?

理论上是的。你不妨去拿一部分先用NaOH调调PH试试。
4楼2012-03-02 10:36:05
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Shoney

木虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by dshlove at 2012-03-02 10:36:05:
理论上是的。你不妨去拿一部分先用NaOH调调PH试试。

因为我是按照文献上的配方来配制溶液的
文献给出的配方是:Na+=0.145mol/L,K+=0.0033mol/L,HEPES=0.02mol/L
我就认为应该是NaCl=0.145mol/L,KCl=0.0033mol/L
难道这Na+还包括了一部分NaOH?如果是的话,那NaCl和NaOH的比例是多少?
如果按照你说的加NaOH调,那势必会改变Na+的浓度了
5楼2012-03-03 10:14:34
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by Shoney at 2012-03-03 10:14:34:
因为我是按照文献上的配方来配制溶液的
文献给出的配方是:Na+=0.145mol/L,K+=0.0033mol/L,HEPES=0.02mol/L
我就认为应该是NaCl=0.145mol/L,KCl=0.0033mol/L
难道这Na+还包括了一部分NaOH?如果是的话,那 ...

你应该是用来做buffer的吧。我们的2×HEPES缓冲盐溶液的配制是
将1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2HPO4.2H2O1g HEPES溶解在90ml的蒸馏水,用0.5M NaOH调节至所需pH值,再用蒸馏水定容至100ml即可。
我不知道你的文献中是指什么。
6楼2012-03-05 09:08:25
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Shoney

木虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by dshlove at 2012-03-05 09:08:25:
你应该是用来做buffer的吧。我们的2×HEPES缓冲盐溶液的配制是
将1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2HPO4.2H2O1g HEPES溶解在90ml的蒸馏水,用0.5M NaOH调节至所需pH值,再用蒸馏水定容至100ml即可。
我不知道 ...

也是用来做buffer的
7楼2012-03-05 09:50:15
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chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
Shoney(金币+1): 谢谢应助 2012-03-05 18:47:26
HEPES buffer缓冲溶液的配制方法HEPES分子量为238.31,化学名:4-羟乙基哌嗪乙磺酸,分子式: C8H18N2O4S。
HEPES常用于生物缓冲剂,pH值缓冲范围:6.8-8.2,用在生化诊断试剂盒、DNA/RNA提取试剂盒及PCR诊断试剂盒里。对细胞无毒性作用。它是一种氢离子缓冲剂,能较长时间控制恒定的pH范围。使用终浓度为10-50mmol/L。
关于HEPES 缓冲溶液的配制,不同的文献资料有不同的说法。根据用途,一种是单纯的HEPES+NaOH,另一种是HEPES+盐。各种配制方法总结如下:

一、500ml 1 M HEPES, pH = 7.0 Stock solution的配制
119.15 g HEPES 溶解在400ml蒸馏水中,加0.5~1M 的NaOH水溶液调节至少所需pH(HEPES的有效pH 范围是6.8~8.2),然后用蒸馏水定容至500ml,于4摄氏度保存。

二、加少量盐的HEPES Buffer配方(500ml)
HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na2HPO4.7H2O 0.198g、用0.5M NaOH 水溶液调节pH值,最后定容。

三、2×HEPES缓冲盐溶液的配制
将1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucan or dextran)和1g HEPES溶解在90ml的蒸馏水,用0.5M NaOH调节至所需pH值,再用蒸馏水定容至100ml即可。
8楼2012-03-05 10:17:57
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emeraldine

新虫 (著名写手)

HEPES是酸式的(分子内有磺酸基),所以显酸性。
要用NaOH调pH
9楼2012-07-28 11:27:32
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Shoney

木虫 (著名写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by emeraldine at 2012-07-28 11:27:32
HEPES是酸式的(分子内有磺酸基),所以显酸性。
要用NaOH调pH

我是按照文献的配方来配的,文献中也没说要用NaOH调,难道是默认的?
10楼2012-07-29 09:16:01
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