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m2hy

金虫 (正式写手)

[求助] 化合物分离纯化的问题

由于本课题组无人做微生物次生代谢产物方面的实验,所以特向诸位大侠求助:
1、第一个实验是关于分代谢产物的,我现在发酵了104L,得到乙酸乙酯粗提物  
   仅13克,其中含有少量的氯化钠,由于样品太少,而且自己对这块也是新手,
   准备按实验指导书上,进行硅胶柱分离,走传统方法。目标是把该菌株产生的 次生代谢产物尽可能多的都分离到,得到结构。
问题在于:
1)实验室目前实验设备不足,仅有三根柱子,导师让我看看缺什么,再买。。。我没有经验,希望各位 支支招?
2)和其他学校以同学讨论,她说,样品少的话,可以先上大孔树脂分段,然后液相看出峰条件,再用制备型液相收集样品,这样损失较少。不知道是否可行?

2、另一个实验是我固态发酵做的,粗品得到的也很少,是比较两中发酵方法的化合物产生情况不同,我想问问,如果不分单体的话,有没有好的办法能够说明化合物变化啊。
耐心看完,各位辛苦了,谢谢各位了!
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陆云传奇

银虫 (正式写手)

我做的方向和你的一样
也是先发酵菌  然后做提取分离
不过我们的技术已经成熟
可以交流
NeverGiveUp
8楼2012-09-21 09:01:34
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查看全部 10 个回答

sky10016

木虫 (著名写手)


xiaoxiao270(金币+1): 3Q 2012-02-24 13:01:47
无论如何,如果有HPLC的话,先把得到的粗物质分析一下。
你发酵的是真菌吧,其实粗物质的量不算少了。别人有发酵得到几g的。你的13g不少了。
我没有用过大孔树脂分过段,不过薄层层析柱色谱(短而且粗的硅胶柱)倒是很少的方法。
砍完段后,再用HPLC分析,能制备就直接制备,不能制备的在作进一步的分离。
楼主,核磁解析结构(平面和立体)是重点。
祝你好运。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

方寸间,历数世上桑田沧海;时空里,细问人间暑往寒来;是朋友,星移斗转情不改;是知音,天涯海角记心怀。
2楼2012-02-24 09:49:58
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m2hy

金虫 (正式写手)

送鲜花一朵
引用回帖:
: Originally posted by sky10016 at 2012-02-24 09:49:58:
无论如何,如果有HPLC的话,先把得到的粗物质分析一下。
你发酵的是真菌吧,其实粗物质的量不算少了。别人有发酵得到几g的。你的13g不少了。
我没有用过大孔树脂分过段,不过薄层层析柱色谱(短而且粗的硅胶柱) ...

谢谢你哦,我发酵的不是真菌,是粘细菌,由于实验室技术资源很少,没有人带,我们其他组有同学得到28克粗品,分的单体克数太少,都打不出谱,我有点怕。。。
人生能有几回搏?此时不搏待何夕?
3楼2012-02-24 12:35:21
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热爱生命的猪

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
xiaoxiao270(金币+1): 3Q 2012-02-24 13:01:54
m2hy(金币+5): ★★★很有帮助 谢谢交流! 2012-02-24 18:26:23
13g应该不算少的,呵呵
不知道lz里面大概有多少个组分?以前做十几个发酵产物组分的时候有用过大孔树脂分段,梯度洗脱就能分段了,HPLC可以检测分段效果,然后在过硅胶柱粗分,要是组分多而且极性相近的话建议lz你买细的硅胶,耗时一点没关系,

如果不需要分离单体的话HPLC不是就可以看出相对变化么?或者你做个标准曲线神马的也可以看绝对的啊,要是有条件做个LC-MS就更好了呢!我看别人探索发酵条件一般就用HPLC就够了呢。。。
做个工作狂,,,哈哈
4楼2012-02-24 12:51:23
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