应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » T7载体的IPTG诱导
52/1返回列表
查看: 3622  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

ss000qq

金虫 (正式写手)

[求助] T7载体的IPTG诱导

大家好！
      我在做基因克隆，载体用的是T7载体，由于克隆的基因较多，所以蛋白诱导方面比较麻烦。可能每个基因所表达蛋白的条件都不一样，我现在想粗略的看一下诱导时间和温度以及诱导剂添加量对诱导的影响，我用的诱导剂是IPTG。我想请教一下一般IPTG在温度，时间，用量上有没有通用的范围或规则？我有看过文献报道，说T7载体用IPTG诱导会容易形成包涵体。
      而且我现在是粗略的诱导检测有无蛋白表达，所以并没有在OD=0.6-0.8时诱导，而且诱导一般是过夜诱的，诱导温度20℃，不知会否对这种载体的诱导有影响？
      我的宿主细胞是BL21. 请同行高手给与指教！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2012-02-23 18:52:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ss000qq

金虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by wulei0708 at 2012-06-28 09:21:00
T7启动子的载体在BL21中是不可能表达的，必须在BL21(DE3)中才能表达。

不好意思，我没有写清楚，我的就是BL21(DE3)感受态。谢谢。
赞一下 回复此楼
11楼2012-06-28 12:32:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

qjy_134

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
amisking(金币+2): 鼓励积极应助！ 2012-02-23 20:46:42
ss000qq(金币+1): ★有帮助 谢谢 2012-02-25 13:59:57
你用1ml TB 培养基（用那种透气好一点的试管），挑2-3个菌落，37@250rpm培养个2-3个小时（菌看上去浑浊了），加IPTG终浓度1mM.再培养个2个小时，电泳看结果
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2012-02-23 20:33:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ss000qq

金虫 (正式写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by qjy_134 at 2012-02-23 20:33:17:
你用1ml TB 培养基（用那种透气好一点的试管），挑2-3个菌落，37@250rpm培养个2-3个小时（菌看上去浑浊了），加IPTG终浓度1mM.再培养个2个小时，电泳看结果

你的诱导温度不调吗？还是高温诱导？
赞一下 回复此楼
3楼2012-02-23 21:16:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果只是看能不能表达，不涉及的到表达出来的有没有活性的问题，1mMIPTG，37度2个小时就可以检测的。
赞一下 回复此楼
4楼2012-02-23 21:30:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭