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棕榈酸对硝基苯酯怎么溶解
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| 我用棕榈酸对硝基苯酯做脂肪酶的酶活测定实验，我用水的缓冲液和异丙醇都不太溶，请教一下该怎么办。 |
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tuobaohua
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p-NPP（对硝基苯棕榈酸酯）法： 将30㎎ p-NPP溶解于10ml异丙醇和90ml Tris-HCl缓冲液（PH7.4）中，同时加入TritonX-100 200㎎，组成底物溶液。0.1ml酶液加入2ml底物溶液中，在指定温度下（可以是35℃，或其他温度）孵育一段时间（约10min左右，这个看情况），通过酶的作用，释放出的对硝基苯在分光光度计405nm被检测。一个单位的脂肪酶活力定义为每分钟分解p-NPP并释放出1μmol对硝基苯所需的酶量。 脂肪酶活性测定 1 pNP-乙腈-丙酮标准曲线的构建： 原液：将pNP溶解与PBS（PH6.5,0.01M）和乙腈，丙酮溶液中。 稀释液：及与配置原液时相同体积的PBS，乙腈，丙酮溶液。 10ml测试体系：原液投入量+稀释液投入量 = 10ml 空白对照：稀释液10ml 8组测试组：原液不同投入梯度+ 相应稀释液 = 10ml. 测OD405,得到标准曲线方程y = A x + B,和斜率 2 脂肪酶的酶活测定: Lipase 的游离酶的酶活测定: 第一步:称取 Lipase 干粉(精酶),用10ml PH6.5 0.01m的PBS溶解保存. 第二步:移取上面配制的酶液50ul于摇瓶中,再加入PH 6.5 0.01m的PBS 2.8ml,在摇床中37度,150rpm 条件下震荡几分钟后加入10mM 的对硝基苯酚乙酯150ul,加入后立即计时三分钟反应.。 第三步:三分钟反应结束后立即加入丙酮3ml终止反应,继续震荡几分钟后过滤,取滤液静态测OD405 值. 空白配制：PH 6.5 0.01m的PBS 2.85ml+对硝基苯酚乙酯+丙酮 3 比活力计算 将测得的0D405，代入标准曲线方程，根据活力测定反应体积，脂肪酶蛋白浓度和反应时间，得到比活力：X um/min/mg 这里面提到PBS（PH6.5,0.01M）和乙腈，丙酮溶液中 不知道是不是楼主所需要的东西 https://muchong.com/html/201108/3512704.html 查到很多脂肪酶酶活性采用如下方法测定的https://www.bosar-gz.com/tx_Info.asp?NewsID=257 |
2楼2012-03-04 10:40:54
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