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Jeverl

新虫 (初入文坛)

[求助] 抗体F(ab‘)2的纯化。

最近在做抗体的胃蛋白酶切,想得到纯的F(ab‘)2片断。
酶切完过protein A柱子,除去了没有反应完的IgG(IgG2a亚类)。
非还原SDS-PAGE显示还是有些杂带,40kd,70kd左右的都有,但主要带还是F(ab‘)2。
现在想得到纯的F(ab‘)2(110kd)片断,有什么好的办法?
文献里很多都是用层析柱,可是实验室没有蛋白纯化系统和相关仪器。
现在考虑能不能买填料自己装个柱子,比如DEAE Sephadex A-50,然后手动进样,洗脱,不知道可行不?
有做过相关方面实验的朋友吗?还请不吝指教!万分感激!

[ Last edited by Jeverl on 2012-2-22 at 15:59 ]

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mssj300130

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

有柱子买填料的话,再有个好点的泵问题不是太大,多wash,浓缩了跑胶呗,注意柱长和流速,别光看横截面积决定流速,好运
2楼2012-04-10 13:26:58
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mssj300130

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

当然如果你要手推的话还不如直接买现成的膜
3楼2012-04-10 13:28:13
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277961055

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

曾经过过柱子,柱效果不是很明显,分子量相差不大,一般都区分不开;对柱效要求特别高。
4楼2012-05-16 09:17:18
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