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uuu555000

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[交流] 诱变难做啊

我们实验室合成了一种植物源农药，可以防治枯萎病菌，导师目前让我做的诱变寻找抗药菌株，以便了解其杀菌机理，哎郁闷啊！该如何做啊，紫外诱变试过，实验室条件有限，光复活很明显，目前是做硫酸二乙酯诱变，毫无头绪啊，有人做过类似的实验不？求教，

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1楼 2012-02-21 22:27:05

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necilyx

金虫 (正式写手)

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★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
uuu555000(金币+13): 2012-02-22 20:10:24

这种诱变的话建议物理诱变配合化学诱变，物理选紫外就可以，首先找到最大致死率的剂量，这个剂量包括的比较多，要反复优化，比如照射时间，接受照射的菌体浓度，照射距离，建议晚上进行，找个台灯，换上红色灯泡就可以，诱变完之后涂布平板记着要用黑色不透光布包起来，培养一段时间（根据菌体生长曲线确定）。化学诱变楼主用的硫酸二乙酯诱变我用过，这种诱变剂毒性相对小一些，用的时候注意要将硫酸二乙酯与乙醇或丙酮混合（5:95就可以）作为诱变母液，不然不会和菌液混合，一般10ml10的六次方的菌液加0.5ml到1ml诱变母液就可以（这个需要楼主自己优化诱变浓度），之后摇床培养一段时间（同样需要优化诱变时间）最后涂布之前别忘加终止剂硫代硫酸钠（浓度忘了，楼主自己查一查把）加入与硫酸二抑制体积为1：1，之后可以涂布平板了。其实诱变过程相对比较简单，难的是筛选，建议楼主可以采用推理选育来筛选，关于推理选育网上有很多文章，楼主可以自己查，另外，目前来说致死率在75%~85%之间的诱变是比较好的，既可以保证菌体数量，又可以保证较高的正突变率~~95%的致死率在正突变率上很难保证~~