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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 诱变难做啊
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uuu555000

捐助贵宾 (正式写手)

[交流] 诱变难做啊

我们实验室合成了一种植物源农药，可以防治枯萎病菌，导师目前让我做的诱变寻找抗药菌株，以便了解其杀菌机理，哎郁闷啊！该如何做啊，紫外诱变试过，实验室条件有限，光复活很明显，目前是做硫酸二乙酯诱变，毫无头绪啊，有人做过类似的实验不？求教，
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1楼 2012-02-21 22:27:05
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necilyx

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uuu555000(金币+13): 2012-02-22 20:10:24
这种诱变的话建议物理诱变配合化学诱变，物理选紫外就可以，首先找到最大致死率的剂量，这个剂量包括的比较多，要反复优化，比如照射时间，接受照射的菌体浓度，照射距离，建议晚上进行，找个台灯，换上红色灯泡就可以，诱变完之后涂布平板记着要用黑色不透光布包起来，培养一段时间（根据菌体生长曲线确定）。化学诱变楼主用的硫酸二乙酯诱变我用过，这种诱变剂毒性相对小一些，用的时候注意要将硫酸二乙酯与乙醇或丙酮混合（5:95就可以）作为诱变母液，不然不会和菌液混合，一般10ml10的六次方的菌液加0.5ml到1ml诱变母液就可以（这个需要楼主自己优化诱变浓度），之后摇床培养一段时间（同样需要优化诱变时间）最后涂布之前别忘加终止剂硫代硫酸钠（浓度忘了，楼主自己查一查把）加入与硫酸二抑制体积为1：1，之后可以涂布平板了。其实诱变过程相对比较简单，难的是筛选，建议楼主可以采用推理选育来筛选，关于推理选育网上有很多文章，楼主可以自己查，另外，目前来说致死率在75%~85%之间的诱变是比较好的，既可以保证菌体数量，又可以保证较高的正突变率~~95%的致死率在正突变率上很难保证~~
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5楼2012-02-22 12:35:22
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wjf008

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zhang8826857(金币+2): gulijiaoliu 2012-02-22 12:32:26
做诱变首先要确定诱变的剂量，紫外诱变经济实惠，各种诱变都有各自的特色，紫外诱变既然能存在下去，有它的优势。紫外诱变拿一个诱变箱就可以，或者有窗帘布盖上超净台，晚上做就行。光复活没那么厉害的，可能是你的诱变剂量不够。
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4楼2012-02-22 11:40:21
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zhangyt7638

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uuu555000(金币+1): 2012-02-22 18:26:29
紫外需要反复做，尽量多做几次，回复突变也是有的，是比较烦心的，可以试一下Co60或N离子注入
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2楼2012-02-22 08:58:57
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DoRbIr

金虫 (正式写手)
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uuu555000(金币+1): 2012-02-22 18:26:32
你准备一个红色的灯泡，在拿出培养皿包报纸之类的时候用。白天要是效果不好的话就晚上做吧。还有，我们老师讲要保证至少95%的致死率。
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3楼2012-02-22 10:51:11
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zys1256

金虫 (初入文坛)
4楼是正解啊
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6楼2012-02-22 16:05:36
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uuu555000

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楼: Originally posted by necilyx at 2012-02-22 12:35:22:
这种诱变的话建议物理诱变配合化学诱变，物理选紫外就可以，首先找到最大致死率的剂量，这个剂量包括的比较多，要反复优化，比如照射时间，接受照射的菌体浓度，照射距离，建议晚上进行，找个台灯，换上红色灯泡就 ...

硫酸二乙酯的母液能4度保存不？还是现用现配？
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7楼2012-02-22 18:26:20
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necilyx

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7楼: Originally posted by uuu555000 at 2012-02-22 18:26:20:
硫酸二乙酯的母液能4度保存不？还是现用现配？

现用现配~~母液的溶剂易挥发影响浓度~~
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8楼2012-02-22 19:06:31
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uuu555000

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楼: Originally posted by necilyx at 2012-02-22 19:06:31:
现用现配~~母液的溶剂易挥发影响浓度~~

我用的是一份硫酸二乙酯比四份95%乙醇可以不？我是看文献这种用的比较多
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9楼2012-02-22 20:05:38
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necilyx

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uuu555000: 回帖置顶 2012-02-23 07:13:10
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9楼: Originally posted by uuu555000 at 2012-02-22 20:05:38:
我用的是一份硫酸二乙酯比四份95%乙醇可以不？我是看文献这种用的比较多

这种诱变剂母液的配比不是绝对的，对于不同菌体都有所差异，会在一定范围内，只能给你说个大概范围，上面我说的是我自己做的条件，楼主可以根据文献自己在一定范围内设定比例梯度摸索，所以诱变在前期的优化条件上比较费时费力~~
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10楼2012-02-23 00:07:50
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hxwcq11

禁虫 (小有名气)
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11楼2012-03-21 18:35:41
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necilyx

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11楼: Originally posted by hxwcq11 at 2012-03-21 18:35:41:
诱变前的菌液浓度一般都是10^6个每毫升吗？

你是做的什么菌啊，细菌和霉菌不一样的。
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12楼2012-03-22 00:06:52
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暮雨潇潇0705

金虫 (初入文坛)
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我们现在诱变有做硫酸新霉素的，不过诱变是个几率问题，1000个出一个就不错了，貌似这个比紫外诱变和硫酸二乙酯好些
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13楼2012-03-22 09:40:36
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hxwcq11

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14楼2012-03-22 09:59:23
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hxwcq11

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15楼2012-04-16 09:41:45
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hxwcq11

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16楼2012-04-16 09:43:46
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uuu555000

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16楼: Originally posted by hxwcq11 at 2012-04-16 09:43:46:
硫酸二乙酯溶于酒精后再加缓冲液直接涂到涂好菌液的平板上可以吗？

可以，就是这么做的
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17楼2012-04-16 13:55:02
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hxwcq11

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18楼2012-04-16 19:23:57
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uuu555000

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18楼: Originally posted by hxwcq11 at 2012-04-16 19:23:57:
那硫酸二乙酯浓度怎么算的呢？得溶多少酒精？

没注意，就是一比四，一份硫酸二乙酯比四份95%乙醇
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19楼2012-04-16 19:27:57
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hxwcq11

禁虫 (小有名气)
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20楼2012-04-17 19:23:48
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uuu555000

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20楼: Originally posted by hxwcq11 at 2012-04-17 19:23:48:
1%的是怎么配置的？

你得自己查了
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21楼2012-04-17 20:29:14
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chibang1220

木虫 (著名写手)
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诱变就是工作量大，坚持吧，想快速诱变还是用分子方法吧
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22楼2012-04-17 22:37:04
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some0

铁虫 (初入文坛)
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22楼: Originally posted by chibang1220 at 2012-04-17 22:37:04
诱变就是工作量大，坚持吧，想快速诱变还是用分子方法吧

你好 请问下分子方法可以应用在链霉菌上吗？ 一般步骤是什么呀？
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23楼2015-06-19 10:54:43
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