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诱变难做啊
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| 我们实验室合成了一种植物源农药,可以防治枯萎病菌,导师目前让我做的诱变寻找抗药菌株,以便了解其杀菌机理,哎郁闷啊!该如何做啊,紫外诱变试过,实验室条件有限,光复活很明显,目前是做硫酸二乙酯诱变,毫无头绪啊,有人做过类似的实验不?求教, |
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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
uuu555000(金币+13): 2012-02-22 20:10:24
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
uuu555000(金币+13): 2012-02-22 20:10:24
| 这种诱变的话建议物理诱变配合化学诱变,物理选紫外就可以,首先找到最大致死率的剂量,这个剂量包括的比较多,要反复优化,比如照射时间,接受照射的菌体浓度,照射距离,建议晚上进行,找个台灯,换上红色灯泡就可以,诱变完之后涂布平板记着要用黑色不透光布包起来,培养一段时间(根据菌体生长曲线确定)。化学诱变楼主用的硫酸二乙酯诱变我用过,这种诱变剂毒性相对小一些,用的时候注意要将硫酸二乙酯与乙醇或丙酮混合(5:95就可以)作为诱变母液,不然不会和菌液混合,一般10ml10的六次方的菌液加0.5ml到1ml诱变母液就可以(这个需要楼主自己优化诱变浓度),之后摇床培养一段时间(同样需要优化诱变时间)最后涂布之前别忘加终止剂硫代硫酸钠(浓度忘了,楼主自己查一查把)加入与硫酸二抑制体积为1:1,之后可以涂布平板了。其实诱变过程相对比较简单,难的是筛选,建议楼主可以采用推理选育来筛选,关于推理选育网上有很多文章,楼主可以自己查,另外,目前来说致死率在75%~85%之间的诱变是比较好的,既可以保证菌体数量,又可以保证较高的正突变率~~95%的致死率在正突变率上很难保证~~ |
5楼2012-02-22 12:35:22














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