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清木ing

铜虫 (初入文坛)

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[求助] 蛋白纯化问题

我现在有个蛋白，其中含有很多杂蛋白。我要的目标蛋白带酸性的，我通过DEAE和分子筛都无法得到目标蛋白，哪位高人给点意见啊，急死我了

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1楼 2012-02-20 10:09:19

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德克士27

金虫 (小有名气)

实验狂人

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专业: 生物化学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

估计你做的是野生菌的蛋白纯化，这不是一两步就更搞定的（当然也不排除有些蛋白比较好纯化），我先前也做过半年的蛋白纯化，就是反复的是不同的方法，你的蛋白的等电点这些参数只能稍微参考一下，即使是酸性蛋白也可以尝试各种离子柱，一般是先用DEAE这样的若阴离子柱，或者疏水柱试试，然后再换用强的阴离子柱（如Hitrap Q HP，或者Resource Q），中间也可以试试分子筛等！既然知道目的条带，估计也花不了多长时间，多做些样品，这样就能保证一次尝试很多种柱子，甚至可以纯化出来一定的量。