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清木ing

铜虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白纯化问题

我现在有个蛋白,其中含有很多杂蛋白。我要的目标蛋白带酸性的,我通过DEAE和分子筛都无法得到目标蛋白,哪位高人给点意见啊,急死我了
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德克士27

金虫 (小有名气)

实验狂人

【答案】应助回帖

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估计你做的是野生菌的蛋白纯化,这不是一两步就更搞定的(当然也不排除有些蛋白比较好纯化),我先前也做过半年的蛋白纯化,就是反复的是不同的方法,你的蛋白的等电点这些参数只能稍微参考一下,即使是酸性蛋白也可以尝试各种离子柱,一般是先用DEAE这样的若阴离子柱,或者疏水柱试试,然后再换用强的阴离子柱(如Hitrap Q HP,或者Resource Q),中间也可以试试分子筛等!既然知道目的条带,估计也花不了多长时间,多做些样品,这样就能保证一次尝试很多种柱子,甚至可以纯化出来一定的量。
我用我有限的青春等你的回心转意!
11楼2012-02-22 22:31:22
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

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amisking(金币+1): 鼓励发帖交流! 2012-02-20 19:38:34
既然你的蛋白那么多,肯定是过一根柱子是不行的,也不知道你蛋白的等电点,我觉得你可以先过分子筛,在过离子交换,或者反过来试试也行,过离子交换不止一根柱子。
2楼2012-02-20 10:25:44
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xiaomai1215

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
试试其他分离原理不同的色谱呢?比如疏水类的柱子
3楼2012-02-20 16:14:13
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wujiul590

禁虫 (正式写手)

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本帖内容被屏蔽

4楼2012-02-20 16:18:50
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