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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » transwell invasion实验求助！谢谢！
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daemon850121

金虫 (小有名气)

[求助] transwell invasion实验求助！谢谢！ 已有1人参与

请问哪位朋友做过Transwell invasion实验？Matrigel在24孔transwell上室膜上应该铺几微升？胶应该稀释多少倍？谢谢各位！（我用的细胞是MDA-MB-231，细胞密度是2X10 4）。
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lastchance
1楼 2012-02-16 21:38:35
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain

西瓜(金币+1): 鼓励交流 2012-02-19 18:45:12
我稀释的倍数较低1:4稀释的，铺了25微升，也能检测到传过去的细胞

这边有人稀释20倍
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daemon850121
我的路靠我的脚踩出来！！！不走寻常路！！！
2楼2012-02-17 21:54:26
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daemon850121

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by telomerase at 2012-02-17 21:54:26:
我稀释的倍数较低1:4稀释的，铺了25微升，也能检测到传过去的细胞

这边有人稀释20倍

多谢了
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lastchance
3楼2012-02-19 15:32:38
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daemon850121

金虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by telomerase at 2012-02-17 21:54:26:
我稀释的倍数较低1:4稀释的，铺了25微升，也能检测到传过去的细胞

这边有人稀释20倍

1:4可以成胶吗？用的孔面积是多少啊？怎么铺能保证较均匀？
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lastchance
4楼2012-02-19 15:34:44
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain
小丹木木(金币+2): 热心又专业！ 2012-02-20 09:56:58
daemon850121: 回帖置顶 2012-02-20 15:34:20
可以成胶，用的是BD MatrigelTM  Matrix Basement Membrane 356234，用无酚红的DMEM稀释的
铺的是24孔板带的那种小室，Falcon 8.0 pore size PET track-etched membrane    353097

可以成胶，4度放的时间很重要，4度时间够的话很容易液化。
加进胶后，我用枪尖轻轻的把它图满膜。25微升足够了，多了有点浪费，铺的时候我是在冰盒上操作的，然后37度放置备用。 据说可以放一周，我最多只放了48h，还可以。

传膜是和胶的浓度有关，我这个做的不多。我问了下这边药物室的，他们的事20倍稀释。 所以你可以摸摸条件看。
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我的路靠我的脚踩出来！！！不走寻常路！！！
5楼2012-02-20 08:49:14
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艾叶米虫

铜虫 (小有名气)
一般是稀释8倍吧。太稀了也不好。
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6楼2013-10-14 09:33:53
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2009031318

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by telomerase at 2012-02-20 08:49:14
可以成胶，用的是BD MatrigelTM  Matrix Basement Membrane 356234，用无酚红的DMEM稀释的
铺的是24孔板带的那种小室，Falcon 8.0 pore size PET track-etched membrane    353097

可以成胶，4度放的时间很重要 ...

你好，想问一下，你铺胶加完细胞后，隔几小时后表面会不会有一坨东西？我的一开始上层没有什么东西可是后来部分地方就有一层絮状物，不知道是不是胶没有铺上啊？谢谢！
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7楼2014-07-11 15:52:40
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