24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 566  |  回复: 5

seasonxyz

新虫 (小有名气)

[求助] 诱导前后无明显变化

目的蛋白是outer membrane protein C, 载体是 pQE 60, OD600=0.8时加入IPTG,加IPTG前OmpC的带就很深,诱导后与诱导前基本无变化,可能是什么原因呢?需要更换载体吗?还是膜蛋白就是这样的?非常感谢。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
seasonxyz(金币+1): 2012-01-29 22:24:27
本来表达就很高的话,可以稀释些再跑胶。表达条件也可以尝试优化下,IPTG浓度、温度这些条件可以做个梯度。过年还做实验,很牛哦!新年快乐~
2楼2012-01-25 23:45:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
西瓜(金币+2, 专家考核): ood! 2012-01-29 22:28:11
膜蛋白表达很难,要我也在纯化一个三次跨膜蛋白,表达量很低,但还能用,载体是pet28a,多表达些看看能不能够大兔子用的!

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

jiayoubashaonian
3楼2012-01-28 15:29:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seasonxyz

新虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
: Originally posted by blackrose8089 at 2012-01-28 15:29:02:
膜蛋白表达很难,要我也在纯化一个三次跨膜蛋白,表达量很低,但还能用,载体是pet28a,多表达些看看能不能够大兔子用的!

但是你的至少能看到表达前后有变化是吗?而且能够纯化出来?
4楼2012-01-29 22:25:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
4楼: Originally posted by seasonxyz at 2012-01-29 22:25:51:
但是你的至少能看到表达前后有变化是吗?而且能够纯化出来?

加大表达菌量!
jiayoubashaonian
5楼2012-01-29 22:33:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

whb21

木虫 (著名写手)

载体构建是否正确,还有培养基中是否含有乳糖成分?
6楼2012-01-30 09:52:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 seasonxyz 的主题更新
信息提示
请填处理意见