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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

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[交流] 从单克隆杂交瘤细胞到抗体序列（抗体测序）

最近做杂交瘤细胞里PCR出抗体V区序列.
先提RNA，然后用抗体特异的一套引物RT-PCR，目标片段TA克隆，测序。
发现VH的CDR3位置总有终止密码子，请问有人遇到过这个情况吗？

鉴于上提到杂交瘤传代过多、培养过久会“频繁”的出现各种突变，包括插入、点突变、整个序列不对。所以现在问题集中在杂交瘤的亚克隆过程和培养上，不知各位遇到过这种情况没

[ Last edited by gongeleven on 2012-4-20 at 10:56 ]

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1楼 2012-01-16 09:18:00

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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

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引用回帖:

6楼: Originally posted by lmxu0917 at 2012-01-18 09:49:17:
既然已经是鉴定的单克隆杂交瘤细胞了，那么这个细胞里面的抗体基因该是个功能性抗体基因序列，不应该是截断的抗体基因序列，你可以同时多测几个，以防测序出现问题。
你还可以看看那个终止密码出现的部位通常是 ...

现在又出新问题，就是突变类型，不止是变成终止密码子，还出现CDR3区插入或缺失碱基导致移码。。。
“抗体基因在大肠杆菌中摇瓶培养很容易突变”，难道是我的T载体不好？