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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 从 单克隆杂交瘤细胞 到 抗体序列（抗体测序）
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 从 单克隆杂交瘤细胞 到 抗体序列（抗体测序）

最近做杂交瘤细胞里PCR出抗体V区序列.
先提RNA，然后用抗体特异的一套引物RT-PCR，目标片段TA克隆，测序。
发现VH的CDR3位置总有终止密码子，请问有人遇到过这个情况吗？

鉴于上提到杂交瘤传代过多、培养过久会“频繁”的出现各种突变，包括插入、点突变、整个序列不对。所以现在问题集中在杂交瘤的亚克隆过程和培养上，不知各位遇到过这种情况没

[ Last edited by gongeleven on 2012-4-20 at 10:56 ]
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1楼 2012-01-16 09:18:00
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whui

至尊木虫 (著名写手)
★
gongeleven(金币+1):谢谢参与
有可能。
你试一试用oligoDT反转录，用恒定区做下游引物
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3楼2012-01-17 15:07:40
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whui

至尊木虫 (著名写手)
换个菌种，比如XL1-BLUE……
不要用TOP10, DH5a之类常用感受态菌种
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10楼2012-05-12 18:05:10
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whui

至尊木虫 (著名写手)
★
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2012-12-02 09:25:57
先确定你的杂交瘤有结合等活性；
然后用oligoDT反转录，下游引物定位在CH1/CK/CL的下游，不要用铰链区或恒定区其实不远处的引物
多挑几个克隆，换一种T载体和宿主菌，或者尝试加糖等抑制表达
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13楼2012-12-02 01:32:17
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