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秦川萝卜头

金虫 (小有名气)

[求助] 紫外分光光度计使用波长的确定

大家好,我最近在测脂肪酶的活性,要用对硝基苯酚棕榈酸酯释放的对硝基苯酚的量的多少来确定。我是先用蒸馏水配置了一系列对硝基苯酚浓度(水为参比),来测量吸光值,绘制标准曲线,所选波长是经过扫描了的,317处。而我在测量酶活时,因溶剂不是纯水,还有异丙醇,还有缓冲液,但我空白也用的是这些。为什么在317处测的不是最大值,什么原因啊,请高手指点?谢谢
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只要努力,总会有结果的
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chaijudi

至尊木虫 (著名写手)

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感谢参与,应助指数 +1
秦川萝卜头(金币+5): 2012-02-02 21:02:07
不清楚你的缓冲pH是多少,如果是偏碱性的,那最大吸收波长必定是红移的,而且吸收强度也大。
由于酚羟基的解离引起,其次是酶的吸收问题!@
3楼2012-01-16 13:25:38
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deepwaterh

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
同一种物质在不同溶剂中的最大吸收波长是不一样的,你在绘制标准曲线的时候用的溶液应该和你测酶活的时候的一样
4楼2012-01-16 16:32:08
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bobking67310

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不知道楼主是否在测量时溶液中含有脂肪酶,脂肪酶属于蛋白质,蛋白质在紫外上也会出峰,楼主如果是测对硝基苯酚的含量,是不是考虑参比溶液中加入相应含量的蛋白质,去除背景影响。
2楼2012-01-16 10:14:10
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秦川萝卜头

金虫 (小有名气)

引用回帖:
楼: Originally posted by bobking67310 at 2012-01-16 10:14:10:
不知道楼主是否在测量时溶液中含有脂肪酶,脂肪酶属于蛋白质,蛋白质在紫外上也会出峰,楼主如果是测对硝基苯酚的含量,是不是考虑参比溶液中加入相应含量的蛋白质,去除背景影响。

我的空白里边加的也有脂肪酶!空白跟实验组加的东西一样!
只要努力,总会有结果的
5楼2012-01-16 17:40:24
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秦川萝卜头

金虫 (小有名气)

引用回帖:
楼: Originally posted by chaijudi at 2012-01-16 13:25:38:
不清楚你的缓冲pH是多少,如果是偏碱性的,那最大吸收波长必定是红移的,而且吸收强度也大。
由于酚羟基的解离引起,其次是酶的吸收问题!@

我的PH确实偏碱!那我做对硝基苯酚标准曲线是不是得用我的缓冲溶液配置啊?
只要努力,总会有结果的
6楼2012-01-16 17:42:53
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秦川萝卜头

金虫 (小有名气)

引用回帖:
楼: Originally posted by deepwaterh at 2012-01-16 16:32:08:
同一种物质在不同溶剂中的最大吸收波长是不一样的,你在绘制标准曲线的时候用的溶液应该和你测酶活的时候的一样

假如我用A溶剂配,并且用A溶剂做参比,跟用B溶剂配,B溶剂做参比!在同一波长下测的吸光度一样吗?且最大吸收波长一样吗?谢谢!
只要努力,总会有结果的
7楼2012-01-16 17:47:45
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chaijudi

至尊木虫 (著名写手)

是的!
8楼2012-01-17 08:54:08
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deepwaterh

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 秦川萝卜头 at 2012-01-16 17:47:45:
假如我用A溶剂配,并且用A溶剂做参比,跟用B溶剂配,B溶剂做参比!在同一波长下测的吸光度一样吗?且最大吸收波长一样吗?谢谢!

一般来说,是不一样的
9楼2012-01-17 09:51:10
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秦川萝卜头

金虫 (小有名气)

引用回帖:
楼: Originally posted by deepwaterh at 2012-01-17 09:51:10:
一般来说,是不一样的

溶剂不是用空白已经消除了吗?
只要努力,总会有结果的
10楼2012-01-17 10:06:53
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