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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 紫外分光光度计使用波长的确定
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秦川萝卜头

金虫 (小有名气)

[求助] 紫外分光光度计使用波长的确定

大家好，我最近在测脂肪酶的活性，要用对硝基苯酚棕榈酸酯释放的对硝基苯酚的量的多少来确定。我是先用蒸馏水配置了一系列对硝基苯酚浓度（水为参比），来测量吸光值，绘制标准曲线，所选波长是经过扫描了的，317处。而我在测量酶活时，因溶剂不是纯水，还有异丙醇，还有缓冲液，但我空白也用的是这些。为什么在317处测的不是最大值，什么原因啊，请高手指点？谢谢
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只要努力，总会有结果的
1楼 2012-01-14 22:20:15
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

chaijudi

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
秦川萝卜头(金币+5): 2012-02-02 21:02:07
不清楚你的缓冲pH是多少，如果是偏碱性的，那最大吸收波长必定是红移的，而且吸收强度也大。
由于酚羟基的解离引起，其次是酶的吸收问题！@
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3楼2012-01-16 13:25:38
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deepwaterh

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
同一种物质在不同溶剂中的最大吸收波长是不一样的，你在绘制标准曲线的时候用的溶液应该和你测酶活的时候的一样
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4楼2012-01-16 16:32:08
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普通回帖

bobking67310

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不知道楼主是否在测量时溶液中含有脂肪酶，脂肪酶属于蛋白质，蛋白质在紫外上也会出峰，楼主如果是测对硝基苯酚的含量，是不是考虑参比溶液中加入相应含量的蛋白质，去除背景影响。
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2楼2012-01-16 10:14:10
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秦川萝卜头

金虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by bobking67310 at 2012-01-16 10:14:10:
不知道楼主是否在测量时溶液中含有脂肪酶，脂肪酶属于蛋白质，蛋白质在紫外上也会出峰，楼主如果是测对硝基苯酚的含量，是不是考虑参比溶液中加入相应含量的蛋白质，去除背景影响。

我的空白里边加的也有脂肪酶！空白跟实验组加的东西一样！
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只要努力，总会有结果的
5楼2012-01-16 17:40:24
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秦川萝卜头

金虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by chaijudi at 2012-01-16 13:25:38:
不清楚你的缓冲pH是多少，如果是偏碱性的，那最大吸收波长必定是红移的，而且吸收强度也大。
由于酚羟基的解离引起，其次是酶的吸收问题！@

我的PH确实偏碱！那我做对硝基苯酚标准曲线是不是得用我的缓冲溶液配置啊？
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只要努力，总会有结果的
6楼2012-01-16 17:42:53
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秦川萝卜头

金虫 (小有名气)
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楼: Originally posted by deepwaterh at 2012-01-16 16:32:08:
同一种物质在不同溶剂中的最大吸收波长是不一样的，你在绘制标准曲线的时候用的溶液应该和你测酶活的时候的一样

假如我用A溶剂配，并且用A溶剂做参比，跟用B溶剂配，B溶剂做参比！在同一波长下测的吸光度一样吗？且最大吸收波长一样吗？谢谢！
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只要努力，总会有结果的
7楼2012-01-16 17:47:45
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chaijudi

至尊木虫 (著名写手)
是的！
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8楼2012-01-17 08:54:08
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deepwaterh

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 秦川萝卜头 at 2012-01-16 17:47:45:
假如我用A溶剂配，并且用A溶剂做参比，跟用B溶剂配，B溶剂做参比！在同一波长下测的吸光度一样吗？且最大吸收波长一样吗？谢谢！

一般来说，是不一样的
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9楼2012-01-17 09:51:10
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秦川萝卜头

金虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by deepwaterh at 2012-01-17 09:51:10:
一般来说，是不一样的

溶剂不是用空白已经消除了吗？
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只要努力，总会有结果的
10楼2012-01-17 10:06:53
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