24小时热门版块排行榜    

查看: 3624  |  回复: 13

秦川萝卜头

金虫 (小有名气)

[求助] 紫外分光光度计使用波长的确定

大家好,我最近在测脂肪酶的活性,要用对硝基苯酚棕榈酸酯释放的对硝基苯酚的量的多少来确定。我是先用蒸馏水配置了一系列对硝基苯酚浓度(水为参比),来测量吸光值,绘制标准曲线,所选波长是经过扫描了的,317处。而我在测量酶活时,因溶剂不是纯水,还有异丙醇,还有缓冲液,但我空白也用的是这些。为什么在317处测的不是最大值,什么原因啊,请高手指点?谢谢
回复此楼
只要努力,总会有结果的
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

chaijudi

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
秦川萝卜头(金币+5): 2012-02-02 21:02:07
不清楚你的缓冲pH是多少,如果是偏碱性的,那最大吸收波长必定是红移的,而且吸收强度也大。
由于酚羟基的解离引起,其次是酶的吸收问题!@
3楼2012-01-16 13:25:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

deepwaterh

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
同一种物质在不同溶剂中的最大吸收波长是不一样的,你在绘制标准曲线的时候用的溶液应该和你测酶活的时候的一样
4楼2012-01-16 16:32:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

bobking67310

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不知道楼主是否在测量时溶液中含有脂肪酶,脂肪酶属于蛋白质,蛋白质在紫外上也会出峰,楼主如果是测对硝基苯酚的含量,是不是考虑参比溶液中加入相应含量的蛋白质,去除背景影响。
2楼2012-01-16 10:14:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

秦川萝卜头

金虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by bobking67310 at 2012-01-16 10:14:10:
不知道楼主是否在测量时溶液中含有脂肪酶,脂肪酶属于蛋白质,蛋白质在紫外上也会出峰,楼主如果是测对硝基苯酚的含量,是不是考虑参比溶液中加入相应含量的蛋白质,去除背景影响。

我的空白里边加的也有脂肪酶!空白跟实验组加的东西一样!
只要努力,总会有结果的
5楼2012-01-16 17:40:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

秦川萝卜头

金虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by chaijudi at 2012-01-16 13:25:38:
不清楚你的缓冲pH是多少,如果是偏碱性的,那最大吸收波长必定是红移的,而且吸收强度也大。
由于酚羟基的解离引起,其次是酶的吸收问题!@

我的PH确实偏碱!那我做对硝基苯酚标准曲线是不是得用我的缓冲溶液配置啊?
只要努力,总会有结果的
6楼2012-01-16 17:42:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

秦川萝卜头

金虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by deepwaterh at 2012-01-16 16:32:08:
同一种物质在不同溶剂中的最大吸收波长是不一样的,你在绘制标准曲线的时候用的溶液应该和你测酶活的时候的一样

假如我用A溶剂配,并且用A溶剂做参比,跟用B溶剂配,B溶剂做参比!在同一波长下测的吸光度一样吗?且最大吸收波长一样吗?谢谢!
只要努力,总会有结果的
7楼2012-01-16 17:47:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chaijudi

至尊木虫 (著名写手)

是的!
8楼2012-01-17 08:54:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

deepwaterh

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 秦川萝卜头 at 2012-01-16 17:47:45:
假如我用A溶剂配,并且用A溶剂做参比,跟用B溶剂配,B溶剂做参比!在同一波长下测的吸光度一样吗?且最大吸收波长一样吗?谢谢!

一般来说,是不一样的
9楼2012-01-17 09:51:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

秦川萝卜头

金虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by deepwaterh at 2012-01-17 09:51:10:
一般来说,是不一样的

溶剂不是用空白已经消除了吗?
只要努力,总会有结果的
10楼2012-01-17 10:06:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 秦川萝卜头 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +9 Ldrop2023 2026-08-13 9/450 2026-08-16 13:24 by wukun_007
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +12 archvillain 2026-08-15 23/1150 2026-08-15 20:47 by foyo404
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
信息提示
请填处理意见