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银虫 (小有名气)

[求助] 植物病原真菌纤维素酶测定~~~

大家好，我最近在做植物病原真菌的纤维素酶的活性测定，可是在粗酶液的制备过程中出现了一些问题，特向各位请教~~~
1 粗酶液是否必须要经过硫酸铵的盐析等纯化步骤？
2 在做盐析纯化的过程中，盐析后的沉淀用醋酸-醋酸钠缓冲液溶解不了，不知是什么原因？

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1楼 2012-01-07 02:31:02

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木虫 (正式写手)

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amisking(金币+2): 鼓励发帖交流！ 2012-01-07 20:37:22

如果仅仅测纤维素酶活性。保证你的体系原来没有还原糖存在。可以使用DNS法测滤纸酶活。没必要非要浓缩酶吧。DNS法很灵敏。你网上一搜就有很多

盐析后沉淀。应该加大体积缓冲溶液溶解。相当于复性

微生物学-发酵工程-生化工程-生化与分子生物学-环境毒理学

2楼2012-01-07 12:55:49

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木虫 (正式写手)

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amisking(金币+2): 鼓励积极应助！ 2012-01-07 20:37:32

如果溶解不了。说明有些酶。或者其他杂蛋白，不可逆变性了。

你盐析条件应该温和一些

微生物学-发酵工程-生化工程-生化与分子生物学-环境毒理学

3楼2012-01-07 12:56:31

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