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shiliushu44

金虫 (小有名气)


[交流] 细胞融合时,PEG的使用量

做单抗的同行们,你们细胞融合时,一个小鼠脾脏一般加入多少体积的PEG进行融合呢,我都是加入1ml,有时候感觉加入量太大了。加入量太大会造成怎样的后果呢?谢谢哈

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齐颖颖

新虫 (初入文坛)


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shiliushu44(金币+1): 2012-01-05 20:00:43
tuobaohua(金币+1): 积极应助 2012-01-06 08:37:57
我一般加0.8ML效果不错
3楼2012-01-05 15:57:59
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zhangmu84

新虫 (初入文坛)



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wenjing120(金币+1): 鼓励新虫!欢迎常来科研版! 2012-02-25 22:02:54
我们也就加0.8ML.关键是不要作用的时间太长
4楼2012-02-25 19:43:40
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longqingci

金虫 (小有名气)


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tuobaohua(金币+2): 积极应助,欢迎常来科研版! 2012-03-01 15:35:18
一般来说,书上都写的是0.8,但实际操作中,我们一般看免疫小鼠脾脏细胞的量。通常不计数,但如果目测细胞量较多,可以加入0.8,但对于8周龄左右小鼠,我推荐使用0.7.如果PEG加量多,会造成融合作用太强,融合的杂交瘤反而出出现死亡或者状态不良。建议0.7,作用时间从加入到终止控制在1分钟之内,若脾脏小,可继续降低用量。
5楼2012-03-01 10:17:25
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zhb1986free

金虫 (初入文坛)


★ ★
wenjing120: 金币+2, 鼓励交流!欢迎常来科研版! 2012-03-23 09:32:54
一般为0.8ml.这个添加量的前提是在瘤细胞和脾细胞混合离心后,要将上面的培养基彻底的吸干,残留少许的培养基都会降低PEG的浓度从而影响融合的效果。PEG的作用过程最好不要超过两分钟,整个融合过程(包括后面的终止过程)最好不要超过十分钟。
7楼2012-03-23 09:20:57
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