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majunyang

银虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白纯化遇到问题

从野生菌里纯化不同蛋白酶组分,发酵液过阴离子柱,穿透峰里检测有酶活,7-56ms/cm电导下也有酶活,流速3ML/min,跑蛋白电泳不能确定是不是同一个组分,又过阳离子柱,还是出现在穿透峰里,洗脱峰居然没有,怎么回事??????谢谢!!
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zonegirlcool

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你看到“淀粉酶”的帖子里的话了吗,有时候这就是个小问题,你把样品电导再调低上样试试,电导调到5以下试试,直接用你的平衡BUFFER稀释就行,一般能挂的都会挂上了。
梯度洗脱在摸条件时很有用,一般10-20CV,等你确定洗脱浓度以后就可以等度走了。
20楼2012-03-15 16:07:13
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majunyang

银虫 (初入文坛)

注明下,阴离子和阳离子柱都是用的pH7.4缓冲液
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2楼2011-12-31 10:28:14
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
majunyang: 金币+1, 有帮助 2012-03-22 16:20:54
不知道你的目的蛋白的PH是多少啊,
3楼2011-12-31 16:44:23
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majunyang

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by lihuan0525 at 2011-12-31 16:44:23:
不知道你的目的蛋白的PH是多少啊,

发酵液经硫酸铵沉淀后的沉淀溶于pH7.4缓冲液,不知等电点是多少
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4楼2011-12-31 20:05:17
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