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majunyang

银虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白纯化遇到问题

从野生菌里纯化不同蛋白酶组分,发酵液过阴离子柱,穿透峰里检测有酶活,7-56ms/cm电导下也有酶活,流速3ML/min,跑蛋白电泳不能确定是不是同一个组分,又过阳离子柱,还是出现在穿透峰里,洗脱峰居然没有,怎么回事??????谢谢!!
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狐狸尾巴

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不挂阴离子柱就一定挂阳离子柱吗?
如果只有这两种选择的话,那研究出那么多柱子干嘛啊?
如果你的蛋白盐浓度很低,pH值也调整过,按照标准程序操作,但是最后IEX柱子都不挂,那就试试疏水或者亲和柱。发酵出来的蛋白质由于糖基化或者其他修饰的不均一性或者同工酶也可能导致分离纯化难度加大。
19楼2012-03-15 15:15:07
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majunyang

银虫 (初入文坛)

注明下,阴离子和阳离子柱都是用的pH7.4缓冲液
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2楼2011-12-31 10:28:14
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
majunyang: 金币+1, 有帮助 2012-03-22 16:20:54
不知道你的目的蛋白的PH是多少啊,
3楼2011-12-31 16:44:23
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majunyang

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by lihuan0525 at 2011-12-31 16:44:23:
不知道你的目的蛋白的PH是多少啊,

发酵液经硫酸铵沉淀后的沉淀溶于pH7.4缓冲液,不知等电点是多少
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4楼2011-12-31 20:05:17
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