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majunyang

银虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白纯化遇到问题

从野生菌里纯化不同蛋白酶组分,发酵液过阴离子柱,穿透峰里检测有酶活,7-56ms/cm电导下也有酶活,流速3ML/min,跑蛋白电泳不能确定是不是同一个组分,又过阳离子柱,还是出现在穿透峰里,洗脱峰居然没有,怎么回事??????谢谢!!
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majunyang

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by 凡夫俗子 at 2012-01-02 09:37:30:
建议如下:
1. 将硫酸铵盐析得到的蛋白溶于缓冲液;
2. 取等量不同pH缓冲液,分别放入DEAE胶,将1.步骤中经透析后的蛋白加入到DEAE体系,混匀;
3. 测定每个体系中上清液的酶活,测到酶活最低的一组及可以吸附 ...

恩,谢谢,那盐析后溶于的缓冲液和加入到DEAE体系的缓冲液,pH要一样吗。
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11楼2012-01-04 09:30:43
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majunyang

银虫 (初入文坛)

注明下,阴离子和阳离子柱都是用的pH7.4缓冲液
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2楼2011-12-31 10:28:14
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
majunyang: 金币+1, 有帮助 2012-03-22 16:20:54
不知道你的目的蛋白的PH是多少啊,
3楼2011-12-31 16:44:23
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majunyang

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by lihuan0525 at 2011-12-31 16:44:23:
不知道你的目的蛋白的PH是多少啊,

发酵液经硫酸铵沉淀后的沉淀溶于pH7.4缓冲液,不知等电点是多少
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4楼2011-12-31 20:05:17
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