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达菲鸭

新虫 (初入文坛)

[求助] 与别的菌相比,弧菌做PFGE时,为什么要加一种酶(NotⅠ或SfilⅠ)

老板让我做弧菌的PFGE(脉冲场凝胶电泳),我便查了一些相关的protocol。与之前师姐做过的沙门菌的PFGE相比,网上给出的弧菌的plug制作步骤里,多了一步限制性酶切,一般都是NotⅠ或SfilⅠ。从总体上看,我师姐之前做的plug步骤简单多了。虽然照着protocol做也可以,但我还是很想了解一下为什么。

BTW,网上说加入限制酶是为了比较不同菌的restriction sites的图谱,从而判断细菌的基因相关性。可我的这个实验不需要比较呀,而且我师姐之前做的沙门也没加任何限制性内切酶,这也是我比较confused的原因之一。

拜托各位大侠相助呀!先谢谢啦
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达菲鸭

新虫 (初入文坛)

自己顶一下
2楼2011-12-25 16:54:11
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guoyanbiao

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

楼主,脉冲场凝胶电泳可以分离出2.3M ,1.8M以及2M之间的基因组条带吗?
是这样的,我的目的菌种含有无法分离的杂菌,我想通过脉冲场凝胶电泳,能分离开2.3M ,1.8M以及2M之间的基因组条带吗?我想通过脉冲场凝胶电泳,电泳前不酶切,分离开杂菌的基因组,切回目的基因的胶回收,做16S鉴定
survive and succeed!!!!!!!!
3楼2013-04-18 16:59:25
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