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匿名

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longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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RNA质量挺好的。(条带很锋利,28S与18S之间没有降解的片段,18S底下也没有明显的拖尾)
粗放型我喜欢。
至于你说的18S比28S亮,跟物种、样品取样时期、电泳上样量等都有关系。建议你上样量减少一点,电泳浓度可以配到1.2%甚至1.5%,加大的电压。
不明白为什么这么多人喜欢反转录后通过电泳来检测cDNA。mRNA只占total RNA 3-5%,假如使用3ug total RNA做反转,假设100%反转可以得到90ng 的cDNA。一般marker(5ul)的条带亮度为50ng,但cDNA是弥散(跨度范围大,非集中一条带),加上电泳时染色单链的DNA染色没有双链的亮,你舍得把辛辛苦苦反转得到的全部90ng cDNA拿来跑电泳吗?跑得少又看不见
一般是将反转录产物稀释一定倍数(20倍)用actin的PCR扩增来检测cDNA是否成功合成。
伟大航线....
7楼2011-12-22 10:20:16
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-12-20 18:22:11
你提的什么物种?
图片质量可以,关于条带亮度比例的问题,还是得看你物种;
“反转录一塌糊涂 就没上传”是啥意思,你反转录之后跑胶了?你期望跑胶之后是什么样子的?
2楼2011-12-20 17:12:23
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匿名

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3楼2011-12-20 19:12:11
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

乱七八糟啥样子 下次贴一个看看,也有可能是跑胶的问题哈;
一般反转录结束,我们直接跑一个actin的PCR或者realtime(看起峰圈数),不是直接跑胶的
4楼2011-12-21 08:47:38
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