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amyzhou

银虫 (小有名气)

[求助] 细胞毒性测试

最近在做HepG2细胞的DOX和载药材料的毒性,想把材料加入后,细胞培养24h,再加MTT.想请教各位大侠 培养液应该加多少血清?? 做MTT时用的是无血清培养液,但是现在材料加入后细胞培养24h,要是完全不加血清细胞会死掉的.
想问下 应该加多少比例血清,既能保证细胞不饿死,又不影响我的数据???
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modestmonkey

木虫 (著名写手)

院士级木虫

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2011-12-19 11:13:45
amyzhou(金币+1): 2011-12-20 12:15:33
10%的不受影响,MTT的吸收波长是570nm呢。。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

Struggling-is-a-natural-way-of-strengthening!
2楼2011-12-19 10:20:49
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rainbows1

禁虫 (著名写手)


感谢参与,应助指数 +1
lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2011-12-19 17:08:50
amyzhou(金币+1): 2011-12-20 12:15:39
本帖内容被屏蔽

3楼2011-12-19 12:31:17
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kechong

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2011-12-19 17:09:22
引用回帖:
3楼: Originally posted by rainbows1 at 2011-12-19 12:31:17:
不能换成无血清之后再做MTT么?MTT又不做24h,只要1~3h足够了,太长了会削弱各组间的显著性。

无血清估计细胞长不好,
4楼2011-12-19 14:00:44
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rainbows1

禁虫 (著名写手)


lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2011-12-19 17:09:15
本帖内容被屏蔽

5楼2011-12-19 16:25:48
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红舟流星

荣誉版主 (文坛精英)

志在成为千元户!

优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2011-12-19 22:03:34
引用回帖:
4楼: Originally posted by kechong at 2011-12-19 14:00:44:
无血清估计细胞长不好,

我所在实验室里MTT时间一般指加入MTT前细胞培养时间
加MTT下时间不是培养细胞,而是让经过培养后的细胞死亡,细胞膜溶解
红楼一梦终难寻扁舟载酒且慢行落花流水依惜别月伴明星照前路
6楼2011-12-19 21:17:09
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zlu520

至尊木虫 (职业作家)

限制人

学习了。。
无完人!
7楼2011-12-19 21:50:31
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duruo

荣誉版主 (文坛精英)

孩儿她爹

优秀超版优秀版主优秀区长

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
amyzhou(金币+2): 2011-12-20 12:16:00
血清10%,不会有影响
但不建议细胞和材料一起孵育24小时,你实验的目的应该是评价载药材料以及空白材料的细胞毒性。但以我做DOX对HepG2的经验,一般情况下较好的时间点是在48小时观察。因为药物有一个释放的过程并进入细胞的过程,这需要一定的时间。
这个时间点,基本保证各剂量组间有显著差异。
能攻心则反侧自消,从古知兵非好战;不审势即宽严皆误,后来治蜀要深思
8楼2011-12-20 09:53:41
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amyzhou

银虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
: Originally posted by modestmonkey at 2011-12-19 10:20:49:
10%的不受影响,MTT的吸收波长是570nm呢。。

细胞培养是10%血清, 我以前听说做MTT是是不能加血请的,你这样加10%血清把材料和细胞一起培养 不会掩盖材料对细胞的影响么?? 这样数据还准么??
9楼2011-12-20 12:01:43
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amyzhou

银虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by rainbows1 at 2011-12-19 12:31:17:
不能换成无血清之后再做MTT么?MTT又不做24h,只要1~3h足够了,太长了会削弱各组间的显著性。

MTT 是4个小时就好了的 ,我是想问材料以及DOX跟细胞作用的时候 要不要加血清,因为如果不加的话 24小时 细胞会饿死的
10楼2011-12-20 12:02:35
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