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505945437金虫 (正式写手)
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[求助]
求金黄色葡萄球菌电转方法
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| 小弟做金黄色葡萄球菌电转，总是失败。求高人指点！哪位大侠有成功做过金黄色葡萄球菌电转的，可以分享一下您的protocol吗？ |
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wanjiang09
铁杆木虫 (知名作家)
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【答案】应助回帖
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505945437(金币+5): ★★★很有帮助 2012-01-11 00:18:15
505945437(金币+5): ★★★很有帮助 2012-01-11 00:18:15
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（1） 在冰上解冻电感受态细胞RN4220，添加500 ng~1 μg 纯化后的质粒DNA ，轻轻混匀，室温放置30 min；室温放置很关键，切勿省略。 （2）转移质粒DNA/细胞混合物至2 mm电转杯中(无气泡)； （3）对电转杯进行脉冲(200欧姆, 25 μFd, 2.5千伏) (检查时间常数，应该在3以上)； （5）立即添加400-600 μL 37℃预热的BHI肉汤至电转杯中，转移至灭菌EP管中； （6）200rpm，37°C摇床中孵育2 h； （7）转移细胞至含氟苯尼考(终浓度为10 mg/L)的BHI琼脂培养基上，37℃培养24~48 h观察转化子。 |
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