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piaoyunokok

木虫 (正式写手)

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[交流] 转化问题已有10人参与

最近转化总是不顺利，要么出现假阳性，提质粒没有任何东西；要么直接没有菌落长出；要么就是卫星菌落。。。各种连接比例都试过了，叫我怎么办呀？

还望高手指导一下下啊。。。。。

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vnini

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1楼 2011-12-08 21:34:23

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resurgam

木虫 (著名写手)

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★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖

假阳性可能是抗生素有问题或者感受态被带抗性细菌污染了。如果确定感受态没问题，可以把没做转化的感受态也涂一点在板上，理论上来说不应该长任何东西出来的。如果长了那么恭喜你，你的抗生素有问题了，所有的板都需要重新倒。
提质粒没有任何东西只能说是假阳性了，如果克隆挑的比较多，可以先做个菌液电泳或者菌液PCR什么的，虽然也有假阳性，但好歹筛了一遍不用每个但克隆都提个质粒。把菌液电泳或者菌液PCR结果显阳性的菌液提质粒，提出的质粒在酶切鉴定一下，如果片段大小差不多，则可以送出去测序确定了。
没有菌落长出或者是你连接没连接好，或者是你转化的效率低，或者是你搞错了抗生素。把氨苄抗性的涂到kana板上是不会长的。