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puguilin

禁虫 (小有名气)

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沾欢欢

金虫 (正式写手)

啦啦啦


【答案】应助回帖

puguilin(金币+1): 2011-12-08 18:55:47
个人感觉还是找文献里现成的引物吧,自己设计的很多都不靠谱
2楼2011-12-08 13:37:35
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

P都P不出来肯定有问题了。cDNA质量有检测过吗?可以扩增一下内参基因(actin等,可以从文献找)。如果内参基因都扩增不出来,显然是cDNA不好,原因很多,比价可能的是RNA质量不好。
引物自己设计没问题的,当然前提是你会设计。我就见过文献里面的引物很烂的。
3楼2011-12-08 19:12:39
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ccharlien

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-12-08 19:12:39:
P都P不出来肯定有问题了。cDNA质量有检测过吗?可以扩增一下内参基因(actin等,可以从文献找)。如果内参基因都扩增不出来,显然是cDNA不好,原因很多,比价可能的是RNA质量不好。
引物自己设计没问题的,当然前 ...

文献里的引物烂并不一定是作者水平不行
很大可能是发文章的时候有意写一个效果不那么好的引物序列
4楼2011-12-08 20:50:21
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ccharlien at 2011-12-08 20:50:21:
文献里的引物烂并不一定是作者水平不行
很大可能是发文章的时候有意写一个效果不那么好的引物序列

这个是有可能。还有可能是作者这方面的技术不好。当然,不影响文章质量就是了。不过我碰到的那个情况是内参的引物,这个倒是没必要使绊子。
以前也见过我师兄写文章,他老板把产量故意写低了1/3,关键的技术部分也做了模糊处理,理由是他们以后准备投产,暂时要低调
5楼2011-12-08 21:39:04
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忘忧草_

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引物比较关键,设计的引物位于内含子部分是扩不出目的片段的,建议引物设计以mRNA为模板;引物的退火和延伸比较严格吧,尽量和内参的一致;内参扩得的片段大小要了解,目的片段要尽量接近内参所扩片段。个人心得,仅供参考
不将就
6楼2011-12-08 22:12:33
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