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puguilin

禁虫 (小有名气)
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1楼 2011-12-07 19:49:43
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忘忧草_

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引物比较关键，设计的引物位于内含子部分是扩不出目的片段的，建议引物设计以mRNA为模板；引物的退火和延伸比较严格吧，尽量和内参的一致；内参扩得的片段大小要了解，目的片段要尽量接近内参所扩片段。个人心得，仅供参考
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不将就
6楼2011-12-08 22:12:33
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沾欢欢

金虫 (正式写手)

啦啦啦

【答案】应助回帖

puguilin(金币+1): 2011-12-08 18:55:47
个人感觉还是找文献里现成的引物吧,自己设计的很多都不靠谱
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2楼2011-12-08 13:37:35
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

P都P不出来肯定有问题了。cDNA质量有检测过吗？可以扩增一下内参基因（actin等，可以从文献找）。如果内参基因都扩增不出来，显然是cDNA不好，原因很多，比价可能的是RNA质量不好。
引物自己设计没问题的，当然前提是你会设计。我就见过文献里面的引物很烂的。
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3楼2011-12-08 19:12:39
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ccharlien

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-12-08 19:12:39:
P都P不出来肯定有问题了。cDNA质量有检测过吗？可以扩增一下内参基因（actin等，可以从文献找）。如果内参基因都扩增不出来，显然是cDNA不好，原因很多，比价可能的是RNA质量不好。
引物自己设计没问题的，当然前 ...

文献里的引物烂并不一定是作者水平不行
很大可能是发文章的时候有意写一个效果不那么好的引物序列
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4楼2011-12-08 20:50:21
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