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胡乱走走2011

银虫 (著名写手)

[交流] 引物电泳 已有4人参与

本人最近一直在纠结于PCR扩增后没有任何条带,在论坛里看到有高手建议可以通过引物电泳来检测引物是否有问题,2%琼脂糖胶,点样量5ul,但是都没有条带出来。同样检测了一下actin引物,仍然没有条带,只是actin引物是一直在用的管家基因,这对引物可以保证没有任何问题,请高手指点下到底是为什么?
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Things change, people grow.
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小周

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
你电泳多长时间,电压多大,引物片段较小,时间一长肯定跑出去了。
2楼2011-12-01 18:36:53
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胡乱走走2011

银虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小周 at 2011-12-01 18:36:53:
你电泳多长时间,电压多大,引物片段较小,时间一长肯定跑出去了。

谢谢 LS。
200v,15m,电压高了吗?
看到有贴子说跑15m。电压电流一般设置为多少呢?
Things change, people grow.
3楼2011-12-02 08:37:55
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julietguo

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
你的电压是不是有点高啊,你可以再跑一次,时间短点再看
4楼2011-12-02 08:50:59
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阳光香味

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
那你的marker有没有跑出来吗?
haveaniceday
5楼2011-12-02 09:43:44
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胡乱走走2011

银虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 阳光香味 at 2011-12-02 09:43:44:
那你的marker有没有跑出来吗?

谢谢你。
我没有点M,因为引物长度只有几十bp,M最小条带也是100bp,所以就没有点。另外点样的引物浓度是100uM,会不会浓度太低了?
Things change, people grow.
6楼2011-12-02 12:03:23
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胡乱走走2011

银虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by julietguo at 2011-12-02 08:50:59:
你的电压是不是有点高啊,你可以再跑一次,时间短点再看

谢谢你。我问过一个做小RNA的同学,他一般设置150V,400A,25m,我把电压设置到120试试吧,另外点样引物浓度为100uM,会不会浓度太低了?
Things change, people grow.
7楼2011-12-02 12:05:07
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q307078056

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
你做引物电泳,建议用 聚丙烯酰胺变性胶电泳来做·
不过,这个方法操作起来比较复杂,用时也比较长。

第一、你确认你的PCR配方、pcr程序无误;
第二、应确认所用模版无误;
第三、考虑你的maker一起做个对照,可以查看你的凝胶配制情况
第四、引物的BP一般都小于27,所以,你直接用琼脂糖电泳很难看··  

可以试试,在200V下跑1~2min 就查看一下条带的位置··
人生不是一种享受,而是一桩沉重异常的工作
8楼2011-12-03 00:54:09
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