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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 引物电泳
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胡乱走走2011

银虫 (著名写手)

[交流] 引物电泳 已有4人参与

本人最近一直在纠结于PCR扩增后没有任何条带，在论坛里看到有高手建议可以通过引物电泳来检测引物是否有问题，2%琼脂糖胶，点样量5ul，但是都没有条带出来。同样检测了一下actin引物，仍然没有条带，只是actin引物是一直在用的管家基因，这对引物可以保证没有任何问题，请高手指点下到底是为什么？
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Things change, people grow.
1楼 2011-12-01 13:48:18
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小周

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
你电泳多长时间，电压多大，引物片段较小，时间一长肯定跑出去了。
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2楼2011-12-01 18:36:53
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胡乱走走2011

银虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小周 at 2011-12-01 18:36:53:
你电泳多长时间，电压多大，引物片段较小，时间一长肯定跑出去了。

谢谢 LS。
200v，15m，电压高了吗？
看到有贴子说跑15m。电压电流一般设置为多少呢？
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Things change, people grow.
3楼2011-12-02 08:37:55
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julietguo

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
你的电压是不是有点高啊，你可以再跑一次，时间短点再看
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4楼2011-12-02 08:50:59
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阳光香味

银虫 (小有名气)
★
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那你的marker有没有跑出来吗？
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haveaniceday
5楼2011-12-02 09:43:44
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胡乱走走2011

银虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 阳光香味 at 2011-12-02 09:43:44:
那你的marker有没有跑出来吗？

谢谢你。
我没有点M，因为引物长度只有几十bp，M最小条带也是100bp，所以就没有点。另外点样的引物浓度是100uM，会不会浓度太低了？
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Things change, people grow.
6楼2011-12-02 12:03:23
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胡乱走走2011

银虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by julietguo at 2011-12-02 08:50:59:
你的电压是不是有点高啊，你可以再跑一次，时间短点再看

谢谢你。我问过一个做小RNA的同学，他一般设置150V，400A，25m，我把电压设置到120试试吧，另外点样引物浓度为100uM，会不会浓度太低了？
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Things change, people grow.
7楼2011-12-02 12:05:07
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q307078056

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
你做引物电泳，建议用 聚丙烯酰胺变性胶电泳来做·
不过，这个方法操作起来比较复杂，用时也比较长。

第一、你确认你的PCR配方、pcr程序无误；
第二、应确认所用模版无误；
第三、考虑你的maker一起做个对照，可以查看你的凝胶配制情况
第四、引物的BP一般都小于27，所以，你直接用琼脂糖电泳很难看··  

可以试试，在200V下跑1~2min 就查看一下条带的位置··
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人生不是一种享受，而是一桩沉重异常的工作
8楼2011-12-03 00:54:09
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