24小时热门版块排行榜    

查看: 1467  |  回复: 7

胡乱走走2011

银虫 (著名写手)

[交流] 引物电泳 已有4人参与

本人最近一直在纠结于PCR扩增后没有任何条带,在论坛里看到有高手建议可以通过引物电泳来检测引物是否有问题,2%琼脂糖胶,点样量5ul,但是都没有条带出来。同样检测了一下actin引物,仍然没有条带,只是actin引物是一直在用的管家基因,这对引物可以保证没有任何问题,请高手指点下到底是为什么?
回复此楼
Things change, people grow.
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小周

铁杆木虫 (著名写手)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
你电泳多长时间,电压多大,引物片段较小,时间一长肯定跑出去了。
2楼2011-12-01 18:36:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡乱走走2011

银虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小周 at 2011-12-01 18:36:53:
你电泳多长时间,电压多大,引物片段较小,时间一长肯定跑出去了。

谢谢 LS。
200v,15m,电压高了吗?
看到有贴子说跑15m。电压电流一般设置为多少呢?
Things change, people grow.
3楼2011-12-02 08:37:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

julietguo

银虫 (正式写手)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
你的电压是不是有点高啊,你可以再跑一次,时间短点再看
4楼2011-12-02 08:50:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

阳光香味

银虫 (小有名气)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
那你的marker有没有跑出来吗?
haveaniceday
5楼2011-12-02 09:43:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡乱走走2011

银虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 阳光香味 at 2011-12-02 09:43:44:
那你的marker有没有跑出来吗?

谢谢你。
我没有点M,因为引物长度只有几十bp,M最小条带也是100bp,所以就没有点。另外点样的引物浓度是100uM,会不会浓度太低了?
Things change, people grow.
6楼2011-12-02 12:03:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡乱走走2011

银虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by julietguo at 2011-12-02 08:50:59:
你的电压是不是有点高啊,你可以再跑一次,时间短点再看

谢谢你。我问过一个做小RNA的同学,他一般设置150V,400A,25m,我把电压设置到120试试吧,另外点样引物浓度为100uM,会不会浓度太低了?
Things change, people grow.
7楼2011-12-02 12:05:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

q307078056

银虫 (正式写手)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
你做引物电泳,建议用 聚丙烯酰胺变性胶电泳来做·
不过,这个方法操作起来比较复杂,用时也比较长。

第一、你确认你的PCR配方、pcr程序无误;
第二、应确认所用模版无误;
第三、考虑你的maker一起做个对照,可以查看你的凝胶配制情况
第四、引物的BP一般都小于27,所以,你直接用琼脂糖电泳很难看··  

可以试试,在200V下跑1~2min 就查看一下条带的位置··
人生不是一种享受,而是一桩沉重异常的工作
8楼2011-12-03 00:54:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 胡乱走走2011 的主题更新
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 20:58 by Equinoxhua
[基金申请] 师弟论文见刊大半年才想起来申请专利,还能抢救一下吗? +5 13108017953 2026-09-21 5/250 2026-09-27 16:46 by Leogzhya
[博后之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:42 by 4IW0sJvtEqX8
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:26 by 4IW0sJvtEqX8
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:21 by 4IW0sJvtEqX8
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:15 by 4IW0sJvtEqX8
[考博] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:03 by 4IW0sJvtEqX8
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 oeyPlfmMUpOC 2026-09-26 3/150 2026-09-27 09:13 by 4IW0sJvtEqX8
[公派出国] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:44 by XgCC8uTcwILl
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:42 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:39 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:32 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:08 by XgCC8uTcwILl
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:05 by XgCC8uTcwILl
[考研] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 05:56 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:56 by XgCC8uTcwILl
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:50 by XgCC8uTcwILl
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 5/250 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 PGTSwSC3F6nQ 2026-09-24 5/250 2026-09-25 11:19 by yhq9807
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 PGTSwSC3F6nQ 2026-09-24 7/350 2026-09-25 11:18 by yhq9807
信息提示
请填处理意见