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杂面包子

新虫 (小有名气)

[求助] 维生素B12有关物质的测定系统适用性实验无降解峰

如题,照中国药典2010版测定VB12有关物质,系统适用性实验方法如下:精密量取维生素B12 25mg,加10ml水溶解,加入0.1%的氯胺T溶液5ml,0.05mol/L盐酸0.5ml,加水定容至25ml,静置5min,取1ml,加流动相定容至10ml,作为系统适用性溶液。
色谱条件如下:C18柱,检测波长361nm,流动相0.028mol/L磷酸氢二钠:甲醇=76:24,流速1ml/min,柱温30℃,进样量10ul。
色谱图应出现VB12和一个降解峰,相对保留时间0.86左右。可我换了几根柱子,重复了3次都没有发现降解峰的出现,把氯胺T浓度加大也没作用
求前辈高人指点
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杂面包子

新虫 (小有名气)


novus(金币+1): 谢谢分享经验! 2011-12-17 20:54:10
谢谢大家的关注,我现在换了氯胺T,已经顺利做出来了,给以后做这个实验的提个醒,氯胺T是白色的结晶性的粉末,变黄,遇水不能完全溶解表明已失效。另外,东西一定要买好的。
7楼2011-12-17 16:46:57
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leecius

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

杂面包子(金币+1): 谢谢指教,我把氯胺T浓度提高到1%,盐酸加样量也提高,还是没有出现降解峰,会不会是试剂失效? 2011-11-30 16:38:24
楼主可以适当加大降解破坏的条件,看是方法问题还是破坏问题。
心似白云常自在,意如流水任东西。
2楼2011-11-30 13:22:03
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leecius

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

杂面包子(金币+1): 谢谢 2011-11-30 16:47:57
你如果怀疑是试剂出问题的话,我建议你们再买一瓶,但是前提是你先排除是试剂的问题。
心似白云常自在,意如流水任东西。
3楼2011-11-30 16:39:53
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杂面包子

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by leecius at 2011-11-30 13:22:03:
楼主可以适当加大降解破坏的条件,看是方法问题还是破坏问题。

谢谢,我加大破坏条件以后,只出现了2个未知峰,相对保留时间为0.5,和药典所述的相对保留时间0.86相差很远,和网上找到的系统适用性图也差很远。网上也没查到VB12的降解原理,不知道是试剂问题还是操作过程出得问题。
4楼2011-11-30 16:43:58
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