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wskxbxf

新虫 (小有名气)

[交流] AFLP酶切连接 求高人指点啊已有5人参与

最近做AFLP酶切连接的条件摸索,我用的是植物材料 DNA提取的结果OD260/280都在1.8左右,双酶切用的NEB的EcoRI 和Mse I,酶切分别做了1-6h的梯度,DNA加了400ng左右,没有做DNA的梯度,用的酶切体系是20微升的,但是酶切结果 跑电泳之后,隐隐约约能看到弥散,这几个时间没什么区别,上样量已经用了10微升,但还是看不出来什么,试着做了一下连接,之后做的PCR,结果如果,不知道酶切的问题究竟该怎么解决,连接产物跑电泳也很不理想,如图,请高人指导啊

PCR结果



酶切连接结果电泳图
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HingGuan

铜虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
经验告诉,你PCR的结果是,PCR的反应中有东西出问题了。可以调整镁离子的浓度,或者加入DMSO,或者一些什么其它的。反正多搞几次,就自然解决了。不是迷信,有时就这么神奇,哈哈
11楼2011-12-24 17:54:22
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wskxbxf

新虫 (小有名气)

引用回帖:
1楼: Originally posted by wskxbxf at 2011-11-29 20:09:10:
最近做AFLP酶切连接的条件摸索,我用的是植物材料 DNA提取的结果OD260/280都在1.8左右,双酶切用的NEB的EcoRI 和Mse I,酶切分别做了1-6h的梯度,DNA加了400ng左右,没有做DNA的梯度,用的酶切体系是20微升的,但 ...

没有高人指点 哎
2楼2011-11-30 10:14:31
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7788945

银虫 (小有名气)

非高人想指点,但是。。
3楼2011-11-30 11:05:16
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schkk

至尊木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
PCR图是预扩增还是选择性扩增的结果啊?这个实验最后需要用大板的PAGE的测序胶作电泳的,琼脂糖分辩率不够,跑的效果基本也就这样了
4楼2011-12-05 19:34:04
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