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Marado

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Dreamer

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[求助] 液相新手请大家分析一下这个样品图~谢谢了！

本人是一名液相新手，最近才开始学习使用HPLC，之前实验室都是用液相简单的跑一下乙醇，糖类，而我这次需要测的东西是NADH，中文全名为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，即常说的还原型辅酶Ⅰ，查阅了许多文献，根据其中的一篇文献资料进行重复试验.
该文献的色谱分析条件为：
柱条件：Agilent1200series，columnstable-C18（250minx4．6mm)柱。
梯度洗脱条件：0min100％bufferA；10min50％bufferA；11min100％bufferA；15min100％bufferA。
流速1．0mL／min，
检测波长：254nm，340nm。
柱温：35℃。
bufferA

H7.0 PBS(磷酸钾缓冲液）

本人所用柱子为inertsil OS-SP(C18）（150minx4．6mm）柱
用标准样品跑了一张如图，大约9min的时候出峰……如图所示
之后提取了酵母胞内的NADH跑了几次，出现的峰非常诡异，从9min开始，基线都开始不稳了……求各位老师分析下，需要改进什么，新手虚心请教！谢谢！

图见附件！！

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附件 1 : NADH标准.bmp

2011-11-27 17:19:11, 949.55 K

附件 2 : 跑出来的图.bmp

2011-11-27 17:19:20, 951.05 K

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1楼 2011-11-27 17:19:24

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Marado

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引用回帖:

7楼: Originally posted by foxling2 at 2011-11-29 13:11:25:
从这两张放大图来看：

1 样品很脏，需要前处理。因为你的基线在标准中抬高不明显，而样品抬高明显，如果你的样品含量低，这么高的基线都给淹没了。

2 分离度不够。在标准样出峰处一堆子杂峰，需要改进梯度 ...

如果要改进梯度的话，现有的基础下怎么该比较好，楼下提到了换柱子，实验室比较穷，唯一一根C18的就是150mm，短时间换柱子有点不太现实，样品处理的话我看很多文献都是如是处理的，并没有过多的纯化……如果要进一步纯化，可以给点建议麽，谢谢