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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 内标标准曲线法的内标物什么时候加呢？
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tao8852101

铜虫 (小有名气)

[交流] 内标标准曲线法的内标物什么时候加呢？ 已有14人参与

各位大侠，我看到有的文献上内标物是在样品前处理后，进HPLC之前加入，但这样做不就失去了内标法的意义了吗？（抵消前处理过程中目标物的损失）。求助。。。
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小朋友
1楼 2011-11-25 17:29:33
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回帖置顶 ( 共有1个 )

sciencechn

金虫 (正式写手)
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padodo(金币+5, ACI+1): 很详细的应助！给予奖励 2011-11-30 14:35:25
引用回帖:
16楼: Originally posted by tao8852101 at 2011-11-30 10:55:11:
我看过好几篇文献，有的是在前处理时加内标，有的是在进样前加内标。我的样品要经过复杂的前处理，应该在前处理时加内标才比较准确吧？但是还有一个问题，在前处理时加入的内标物的浓度和做标准曲线时内标物的浓 ...

你要弄清楚 内标是用来帮助进行内标法定量的。
谈一下我的理解：
处理前样品中加入回收率内标（回收率指示物，一般有同位素标记的最合适，含量和分析目标物的中值或均值相近即可）；

进样之前加入进样内标（用性质相近化合物，比如13C同位素用来指示回收率，氘代化合物做进样内标，最严格的情况就是每个待测定的目标化合物分别用13C和氘代同位素进行校正内标。有时候GC-MS分析时候高温和低温化合物可能分别需要各自的进样内标指示；或是不同性质的化合物比如含氯的和含溴的化合物可能仪器响应差别大，最好也分别选用各自的内标）
进样内标和标准曲线的内标浓度一致；

回收率：
一般来说常见的就是基质加标回收率，空白加标回收率；（做方法的文章常见，加标回收率通过高低中三个浓度的化合物加标测定）
样品分析的方法回收率；
这个通过与回收率内标（也可以用进样内标校正响应）峰面积比来计算；
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acnuxy
18楼2011-11-30 12:33:02
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sciencechn

金虫 (正式写手)
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408851978(金币+1): 谢谢回帖 2011-11-27 07:55:45
样品处理之前加入的内标用来指示回收率的。一般称之为Surrogate Standards；
进样之前为了校正或是指示基质干扰、仪器状态、进样等造成的偏差，一般会加入 internal standard；这个内标和你用内标法定量的标准曲线里面的内标浓度一般应该一致（浓度，化合物）

[ Last edited by sciencechn on 2011-11-26 at 19:53 ]
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6楼2011-11-26 19:52:22
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408851978

木虫 (著名写手)

道圣
★ ★
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padodo(金币+1): 积极应助 2011-11-30 14:33:02
之前加是考察回收率，之后加是内标，做标准曲线时用的
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奋斗是金！
5楼2011-11-26 08:01:45
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wzw-502A

木虫 (正式写手)
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padodo(金币+1): 积极应助 2011-11-30 14:33:20
1.做标准曲线的时候，应该在配制标准液的时候加入内标物；
2.定量分析的时候应该在样品预处理前添加，消除前处理过程中目标物的损失。
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进步止于懈怠！
10楼2011-11-28 09:19:46
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wzw-502A

木虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
15楼: Originally posted by tao8852101 at 2011-11-30 10:52:59:
我看过好几篇文献，有的是在前处理时加内标，有的是在进样前加内标。我的样品要经过复杂的前处理，应该在前处理时加内标才比较准确吧？但是还有一个问题，在前处理时加入的内标物的浓度和做标准曲线时内标物的浓 ...

内标法在具体做的时候其实包括两部分吧，一个是内标标准曲线的绘制；一个是样品前处理。在绘制内标法标准曲线时，纵、横坐标中，一个是浓度，一个比值（待分析物与内标物峰面积之比，内标物的浓度是固定的），待分析物的浓度是通过把比值（待分析物与内标物的比值）代人内标标准曲线求出的，样品处理虽然会使内标物有所损失，但是由于待分析物与内标物浓度是同方向变化的，并不影响定量结果，这也是内标法的一个优势所在。
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进步止于懈怠！
20楼2011-11-30 16:01:49
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普通回帖

da1234mao

铁虫 (著名写手)
★
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对的啊，内标是确定处理过程对于物质的影想
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2楼2011-11-25 20:46:51
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天空蔚蓝

金虫 (小有名气)
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408851978(金币+1): 积极应助 2011-11-26 08:01:17
样品处理过程有时是纯化过程，提取过程，这个分析过程是对应目标物质设计的实验方法，对于内标物质可能会有影响，继而含量变化。在处理后加内标可以更准确的定量计算。
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坚定你所坚持的，生活就有希望！
3楼2011-11-25 21:51:17
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padodo

至尊木虫 (职业作家)

胖嘟嘟

优秀版主
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408851978(金币+1): 积极应助 2011-11-26 08:02:22
在哪一步之前加，就可以校正之后步骤的误差~
在HPLC之前加，目的就是校正HPLC分析的误差，和在前处理之前加的目的是不一样的，也不能说就没有意义了~
如果前处理过程的回收率高，可靠性好，可以只在HPLC之前加。
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我有什么能帮助您的吗？
4楼2011-11-25 23:08:10
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wfq0556

木虫 (小有名气)
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408851978(金币+1): 谢谢回帖 2011-11-27 07:56:01
样品处理之前加进去的应该就是替代物（Surrogate ），处理后加进去的为内标。
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7楼2011-11-26 20:33:57
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lg123456

木虫 (正式写手)
学习了
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给你点菊花，你就灿烂！
8楼2011-11-26 21:55:51
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wtt

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 408851978 at 2011-11-26 08:01:45:
之前加是考察回收率，之后加是内标，做标准曲线时用的

同意
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9楼2011-11-27 14:14:23
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