应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 引物设计
61/1返回列表
查看: 691  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

树宝宝zyx

新虫 (小有名气)

[求助] 引物设计

我用的16SrDNA v3区通用引物，参考的文献，上下引物为
27Fb  5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'
1495Rb  5'-CTACGGCTACCTTGTTACGA-3'

PCR电泳结果显示二聚体相当多，PCR条带比较淡，之前让人看过好像是上引物有自聚，可是我不会设计引物，请问能否帮我修改下？不胜感激！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

生物信息学软件应用

» 猜你喜欢
科研真辛苦！
1楼 2011-11-25 16:05:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

love_st

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

可以把全序列copy上去
赞一下 回复此楼
2楼2011-11-25 17:31:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shumin613

禁虫 (正式写手)
★ ★
wanhscn(金币+2): 有道理！同意！ 2011-11-25 21:30:10
树宝宝zyx(金币+4): 2011-11-26 09:43:02
本帖内容被屏蔽
3楼2011-11-25 19:39:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

树宝宝zyx

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by shumin613 at 2011-11-25 19:39:13:
引物二聚体多有可能是引物的量加多了哦，可以适当降低用量试一下。不行就把全序列测出来在primer 5 中自动设计一下。如果打算用原来的引物的话，可以按照引物设计的基本原则改一下，分子克隆上都有基本原则说明的 ...

引物加得不多啊，我怀疑引物用来二聚体了所以使得PCR条带较弱，我想要再合成一个原来的引物的，可是我不会设计优化，能否帮我改下啊？不胜感激！
赞一下 回复此楼
科研真辛苦！
4楼2011-11-26 09:45:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yqq-nobel

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励应助 2011-11-27 16:18:10
这个肯定是 引物的问题，自己在NCBI上找到 该基因，Copy其序列，用Primer5，Primer6 自己设计引物，然后设计引物有一定的要求，你上面的引物中，有二聚体，3‘端 最好不要选碱基A 等等，这些都可以去网上找的，祝LZ好运，
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-11-26 21:14:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

thestormcong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
wanhscn(金币+1): 鼓励应助！ 2011-11-27 16:04:54
wanhscn: F引物这么长？ 2011-11-27 16:06:41
树宝宝zyx(金币+6): 2011-11-28 12:36:36
你的27F，1492R是16s全长通用引物，而不是V3区通用引物，V3区通用引物很多文献上也都有报道F:CGCCCGCCGCGCGCGGCGGGCGGGGCGGGGGCACGGGGGGCCTACGGGAGGCAGCAG前面的是GC夹
R：ATTACCGCGGCTGCTGG
PCR一般都用降落PCR的程序，祝实验顺利！
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2011-11-27 11:52:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 树宝宝zyx 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿北理工298英一数二求调剂 +3 Reframe 2026-04-10 4/200 2026-04-10 08:11 by Delta2012
[考研] 考研调剂 +21 硕星赴 2026-04-09 22/1100 2026-04-10 08:07 by Sammy2
[考研] 一志愿211电子信息347求调剂 +3 554916 2026-04-03 4/200 2026-04-09 22:24 by 554916
[考研] 本科211 工科085400 280分求调剂 可跨专业 +3 LZH（等待调剂中 2026-04-09 3/150 2026-04-09 21:29 by wutongshun
[考研] 调剂 化学 307 +11 73372112 2026-04-09 12/600 2026-04-09 18:52 by vgtyfty
[考研] 一志愿武理车辆 281 求调剂 +5 上岸研究生. 2026-04-07 5/250 2026-04-09 15:56 by only周
[考研] 生物学308分求调剂（一志愿华东师大） +13 相信必会光芒万� 2026-04-06 16/800 2026-04-09 13:54 by 徐良白眉大侠
[考研] 求调剂，262机械专硕 +6 嗯yyl 2026-04-08 6/300 2026-04-09 12:01 by zhouyuwinner
[考研] 一志愿0807 数一英一 313 有没有二轮调剂 +11 emokidd 2026-04-08 12/600 2026-04-09 09:24 by wyf236
[考研] 293分求调剂，外语为俄语 +7 加一一九 2026-04-07 10/500 2026-04-08 20:14 by yutian743
[考研] 265求调剂 +19 小木虫085600 2026-04-06 21/1050 2026-04-08 10:38 by 逆水乘风
[考研] 307求调剂 +3 Youth@@ 2026-04-07 3/150 2026-04-07 09:25 by 小黑不怕难
[考研] 求助 +3 卡卡东88 2026-04-06 4/200 2026-04-06 15:28 by going home
[考研] 346分的生物与医药08600求调剂 +6 常雨阳上岸 2026-04-05 7/350 2026-04-06 12:36 by lys0704
[考研] 296求调剂 +3 汪！？！ 2026-04-05 4/200 2026-04-05 20:13 by 啵啵啵0119
[考研] 298求调剂 +7 manman511 2026-04-05 7/350 2026-04-05 10:29 by 唐沐儿
[考研] 283求调剂 +4 mcbbc 2026-04-03 5/250 2026-04-04 20:51 by imissbao
[考研] 考研调剂 +3 15615482637 2026-04-03 3/150 2026-04-03 22:50 by ms629
[考研] 320调剂 +4 农业工程与信息� 2026-04-03 4/200 2026-04-03 21:40 by lbsjt
[考研] 294求调剂 +6 Grey_Ey 2026-04-03 6/300 2026-04-03 20:46 by 欣喜777
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭