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林夕梦

木虫 (文坛精英)

珊瑚岛碧落堂主~~

[求助] 3.7Kb片段基因与7Kb载体的质粒构建

如题,基因片段3.7Kb载体7Kb,Phage载体。
连接了几次都失败了。要么转化后没有长出克隆,要么长出来也是假阳性,小提质粒后酶切片段大小不对额
大片段不好连呢,求高手指教有妙招改进么??
(转化采用的超级感受态细胞,42度30s)
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许多奇迹,我们相信,才会实现……
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
wanhscn(金币+4): 也有道理! 这个就是碰运气, 运气好就好连,运气不好就难连! 2011-11-19 18:56:38
说什么10K都很容易完全是不负责任,3K以上就很难连了,大于3K的链接效率就直线下降,各大公司的技术支持我都问过,大于3K的就是难连,楼主可以把你的片段发给那个说10K很容易的让他帮你弄。
16楼2011-11-18 08:40:20
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longrna

新虫 (正式写手)

贴上你的连接体系及条件嘛,用哪家公司的酶?
伟大航线....
2楼2011-11-17 18:06:25
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longrna

新虫 (正式写手)

我们一般4度过夜连接,用NEB的酶
伟大航线....
3楼2011-11-17 18:10:05
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林夕梦

木虫 (文坛精英)

珊瑚岛碧落堂主~~

引用回帖:
2楼: Originally posted by longrna at 2011-11-17 18:06:25:
贴上你的连接体系及条件嘛,用哪家公司的酶?

takara的连接酶,16度过夜的
许多奇迹,我们相信,才会实现……
4楼2011-11-17 18:34:36
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