10楼: Originally posted by torontogirl at 2011-11-17 15:50:11:
引用的文献就更不会写的详细了，我看了好多篇都是一笔带过的。

11楼: Originally posted by shizhuang1985 at 2011-11-17 22:21:22:
甘油，或者少量triton助溶效果很明显。

12楼: Originally posted by allmessup at 2011-11-17 23:26:01:
还有如果是published online的文章，可以看一看有没有support information~
那个里面也有很多实验方法的细节~

13楼: Originally posted by torontogirl at 2011-11-18 08:17:58:
恩，甘油我试过，会助溶，可是有一个问题，会严重影响蛋白定量，我们采用BCA试剂盒进行蛋白定量，用其它方法怕蛋白定量不准。

15楼: Originally posted by shizhuang1985 at 2011-11-18 08:47:05:
你做大分子结构？
哪个课题组？
我觉得每次你用同样的方法就可以，能够保证实验的可重复性就足够了。
很多结构文章上methods里提到，他们定量蛋白都是使用测量280nm处的吸收。

16楼: Originally posted by torontogirl at 2011-11-18 19:22:19:
没有，我是做药物的，用280来定量，一定需要蛋白很纯吧。

16楼: Originally posted by torontogirl at 2011-11-18 19:22:19:
没有，我是做药物的，用280来定量，一定需要蛋白很纯吧。

18楼: Originally posted by allmessup at 2011-11-20 00:18:31:
的确，定的是蛋白总量~所以也要和HPLC啊胶啊什么的结合起来看~
不过用nanodrop这货在280定量的确是挺方便的~

一般做大分子结构的都要长晶体啊NMR什么的~蛋白势必会很纯，所以这个应该不是太过在意的东西吧。 ...

1楼: Originally posted by torontogirl at 2011-11-15 15:31:39:
我最近在做AMPK的蛋白纯化，用的是原核表达，诱导表达的大部分目的蛋白都是包涵体，小部分是可溶的。我就利用这小部分的可溶蛋白过了两次His亲和层析柱，纯化出来的纯度大概在85%以上，可惜在浓缩的时候出现大量沉 ...