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richart

金虫 (正式写手)

[求助] 硫酸沉淀一定是蛋白质吗?

请问各位高手,硫酸铵沉淀出来的物质一定是蛋白质吗? 另外硫酸铵分级沉淀的物质有活性,为什么跑蛋白电泳没有带呢?用PEG浓缩也不行,请各位大侠帮忙???
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seahow

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

richart(金币+3): 2011-11-21 08:44:41
你应该先了解沉淀蛋白的原理,前者硫酸铵是通过盐析方法,实际上是抢了蛋白的水,所以沉淀;后者PEG有机沉淀,本质也是抢了水分,而且更剧烈一些。
所以,二者不一定是沉淀蛋白质。沉下来的还有其他东西,这是肯定的尤其是你的粗产品时候,呵呵。
至于分级沉淀有活性而没有条带,那问题就多了, 活性是否真实? page是否合理,等等。
3楼2011-11-13 09:38:50
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shicaozhu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

richart(金币+4): 2011-11-21 08:44:32
硫酸铵能沉淀出的差不多都是蛋白质,但有可能也有小分子的蛋白包裹了一些你的目的蛋白,小分子蛋白在电泳时跑出去了,而目的蛋白含量太低,所以看不到带。要不试试分级沉淀完了用凝胶柱脱盐然后再浓缩上样跑胶看看?
2楼2011-11-12 22:10:34
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rfengyi

禁虫 (正式写手)

richart(金币+3): 2011-11-21 08:44:45
本帖内容被屏蔽

4楼2011-11-13 10:39:36
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弦上的梦99

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by seahow at 2011-11-13 09:38:50
你应该先了解沉淀蛋白的原理,前者硫酸铵是通过盐析方法,实际上是抢了蛋白的水,所以沉淀;后者PEG有机沉淀,本质也是抢了水分,而且更剧烈一些。
所以,二者不一定是沉淀蛋白质。沉下来的还有其他东西,这是肯定 ...

那请问硫酸铵本身在离心时沉淀了没?
5楼2015-01-30 12:33:46
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