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TLC菜鸟

金虫 (正式写手)

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[求助] 求HPLC实际应用实例

求HPLC实际操作应用的技巧，比如说流动相如何调整才能使两个物质分开，相近极性的两个物质怎么分等，在下是新手，急需这方面的知识，希望各位哥哥姐姐能够帮帮我，我即将做自己的实验，现在一点技巧都不会，估计要走很多弯路，望名师指导，谢谢各位，真的谢谢。

[ 来自科研家族药物制剂 ]

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只为活个问心无愧。。

1楼 2011-11-07 23:45:20

已阅关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

2005140303

金虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

TLC菜鸟(金币+5): 极性相近的物质，怎么把他们分开，有没有什么技巧 2011-11-08 00:20:57

这个要根据的你柱子和样品来分析，如果是做反向的话。如果是新手的话你可以按下面的步骤去试试。
1，先确定自己的样品性质和柱子的性质，选择是正相还是反相色谱。
2，我们一般使用的流动相越简单越好，无论是分析，还是对柱子的保存等，对于反相色谱，一般建议直接用甲醇或者乙腈做流动相，对于正相比较多的是正己烷和异丙醇
3，如果在上述流动相下，如果保留时间太短或者太长，可以考虑加入水来调节流动相的极性，从而改变物质的保留
4，如果样品是酸性或者碱性的样品，有可能出现的峰型不好，拖尾或者峰宽等现象，这时候可以考虑加入缓冲盐，缓冲液的PH一般是分析物质PKa+2（碱性样品）或者PKa—2（酸性样品），当然也可以直接加入醋酸，三乙胺等改变峰型。
5，如果在上述情况下还不能达到目的的话，只能使用复杂的流动相体系，所以对于色谱分析条件的建立需要自己不断去积累经验。