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HarveyWang

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海外行者

引用回帖:
10楼: Originally posted by H-xiangzhu at 2011-11-10 14:56:44:
你好!我有个疑问哈,比较白痴的,就是我的样品放通风橱里面会不会有污染的可能呢、?

你到底测什么?
测定酸类物质,就两个小时,应该没事哈。

不过这要看你的实验室到底有多脏?要是飞进去一个苍蝇也是有可能的
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
11楼2011-11-10 15:15:47
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H-xiangzhu

金虫 (正式写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by HarveyWang at 2011-11-10 15:15:47:
你到底测什么?
测定酸类物质,就两个小时,应该没事哈。

不过这要看你的实验室到底有多脏?要是飞进去一个苍蝇也是有可能的

我的是放线菌发酵液,我要测杀虫活性物质,然后确定是胞内还是胞外的,是大分子还是小分子物质。
共同学习,一起进步
12楼2011-11-11 09:46:28
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者


zhang8826857(金币+1): 鼓励交流 2011-11-14 09:21:22
引用回帖:
12楼: Originally posted by H-xiangzhu at 2011-11-11 09:46:28:
我的是放线菌发酵液,我要测杀虫活性物质,然后确定是胞内还是胞外的,是大分子还是小分子物质。

原来这样啊。先看有没有,根本不用向代谢组学一样麻烦。
步骤如下:

1.测定胞外的活性物质:

用灭菌的EP管,无菌取样,然后10000rpm 离心5min,什么放线菌或细菌都会沉下去,然后用无菌的1% NaCl稀释发酵离心上清液一系列浓度。然后做抑菌圈实验。


2.胞内的活性物质:
由于不能确定是溶于有机溶剂的还是水溶性的。故拿细胞破碎液来做。
取菌丝沉淀,用无菌的1% NaCl清洗两遍,以洗掉发酵液。
离心沉淀菌丝体,然后用1% NaCl超声破碎,此时菌丝体越浓越好。

破碎液分为两份:
A份用1% NaCl稀释一下,然后10000rpm 离心20min,上清液用无菌的NaCl稀释一系列梯度,做抑菌圈实验。

B份用有机溶剂,例如无水乙醇或丙酮等萃取,然后蒸干或风干(步骤见前面我说的)。最好用丙酮来做,丙酮容易蒸掉。最后的干燥物用灭菌的1% NaCl稀释一下,做抑菌圈实验。


3.抑菌圈实验:
在平板上涂目的细菌,例如八叠球菌或葡萄球菌等。
用那种灭菌的不锈钢筒(内径大约为4mm,高度大约为1cm,没有底)扣在此平板上。
每个平板可以扣4-8个。
然后向圈内加20uL或50uL的上面的抑菌物质稀释液。
用卡那霉素或青霉素做阳性对照。

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【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
13楼2011-11-11 19:00:37
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H-xiangzhu

金虫 (正式写手)

送鲜花一朵
引用回帖:
13楼: Originally posted by HarveyWang at 2011-11-11 19:00:37:
原来这样啊。先看有没有,根本不用向代谢组学一样麻烦。
步骤如下:

1.测定胞外的活性物质:

用灭菌的EP管,无菌取样,然后10000rpm 离心5min,什么放线菌或细菌都会沉下去,然后用无菌的1% NaCl稀释发酵 ...

好的~~你的回复对我帮助很大,非常感谢你的帮忙~
共同学习,一起进步
14楼2011-11-13 16:38:44
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H-xiangzhu

金虫 (正式写手)

引用回帖:
13楼: Originally posted by HarveyWang at 2011-11-11 19:00:37:
原来这样啊。先看有没有,根本不用向代谢组学一样麻烦。
步骤如下:

1.测定胞外的活性物质:

用灭菌的EP管,无菌取样,然后10000rpm 离心5min,什么放线菌或细菌都会沉下去,然后用无菌的1% NaCl稀释发酵 ...

你好!由于我样品比较多,每次都要超声破碎的话很费时费力,请问我能否用甲醇浸泡呢?浸泡完是不是要去甲醇然后用丙酮等有机溶剂进行处理?
共同学习,一起进步
15楼2011-12-16 13:40:09
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HarveyWang

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海外行者

引用回帖:
15楼: Originally posted by H-xiangzhu at 2011-12-16 13:40:09:
你好!由于我样品比较多,每次都要超声破碎的话很费时费力,请问我能否用甲醇浸泡呢?浸泡完是不是要去甲醇然后用丙酮等有机溶剂进行处理?

直接用丙酮浸泡说不定也行。
振荡浸泡一晚,看看菌体碎了就行。
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
16楼2011-12-16 15:12:02
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H-xiangzhu

金虫 (正式写手)

引用回帖:
16楼: Originally posted by HarveyWang at 2011-12-16 15:12:02:
直接用丙酮浸泡说不定也行。
振荡浸泡一晚,看看菌体碎了就行。

嗯那后面有机溶剂浓缩挥发直接用于生测就可以的吧?
共同学习,一起进步
17楼2011-12-16 23:46:19
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

★ ★ ★
scelab(金币+3): 谢谢热心回复哦~ 2011-12-17 02:31:57
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17楼: Originally posted by H-xiangzhu at 2011-12-16 23:46:19:
嗯那后面有机溶剂浓缩挥发直接用于生测就可以的吧?

如果丙酮的话,可以挥发很快。
直接生测,要稀释很多倍吧?用无菌水。
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
18楼2011-12-17 02:22:46
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xiaopan0102

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3580989楼: Originally posted by HarveyWang at 2011-11-07 14:10:46:
1.我一般就是放在通风橱几个小时,丙酮很快就挥发完了。剩余的主要是水分溶液。
乙醇的较难挥发,几个小时后放在40摄氏度的抽真空的恒温箱中,大约一个小时可以抽完剩余水分。

2.注意事项!
这时候要注意,你到

您好,我想咨询一个问题,我想将发酵液中的大分子和小分子物质分开,做活性试验,然后确定有效部分,再继续鉴定,不知道您有没有好的建议,我应该用什么方法将大小分子分开?然后怎样对有效组分的成分定性?先谢谢了!
19楼2012-05-21 20:22:45
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xz010

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4576786楼: Originally posted by xiaopan0102 at 2012-05-21 20:22:45
您好,我想咨询一个问题,我想将发酵液中的大分子和小分子物质分开,做活性试验,然后确定有效部分,再继续鉴定,不知道您有没有好的建议,我应该用什么方法将大小分子分开?然后怎样对有效组分的成分定性?先谢谢 ...

估计要跑柱子了 不知道我说对不对
20楼2012-06-28 19:41:21
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