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lijingjeanne

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


qinhy(金币+1, PhEPI+1): 多谢回帖~ 2011-11-17 21:57:30
HPLC2008(金币+4): 谢谢!详细! 2011-11-21 14:49:27
HPLC2008(金币+2): ★★★很有帮助 谢谢! 2012-01-19 00:08:11
Sephadex LH20 洗脱溶剂
  Sephadex LH20 洗脱溶剂因分为两类:反相和正相两种。用得最多的是反相溶剂洗脱,以甲醇--水系统最为常见,先用水,逐渐增加甲醇比例,最后用100%甲醇冲柱。正相系统以氯仿--甲醇最为常见,先用50%氯仿--甲醇,逐渐增加甲醇比例,最后用100%甲醇冲柱。
样品的处理和洗脱溶剂的选择
  如果样品极性大,这选用反相溶剂洗脱(甲醇--水),样品用最少体积的甲醇--水(尽可能甲醇少一些)溶解,过滤后,湿法上样(一定要滤喔!要是把Sephadex LH20 堵啦,就得将Sephadex LH20 的柱头部分弃去,很心痛呀)。如果样品极性小,这选用正相溶剂洗脱(氯仿--甲醇),样品用最少体积的氯仿--甲醇溶解,过滤后,湿法上样。
分离的技巧
  (1) 流速不可太快,切切不可新急,所谓欲速则不达。
  (2)柱子尽可能长, Sephadex LH20 柱长的增加将极大地改善分离,所不要吝惜填料,宁可将填料全装在一根大柱子中,不要将填料装成几根小柱。所谓集中优势兵力,打击敌人。
  (3) 馏分一定要接的细,可1/10,或1/20 个保留体积接成一馏分。
  (4) 洗脱体积一般为2-3个保留体积,对特殊保留强的化合物,可洗脱5个保留体积。
  (5)鞣质成分死吸附严重,如不在乎填料者,可用Sephadex LH20 分鞣质
  (6)Sephadex LH20 对黄酮类成分的分离效果极佳,方法很成型,有大量文献参考。
  (7)填料反复使用,每次用完,一般可用甲醇将柱子洗干净,然后用下一次分离的起步溶剂将甲醇替换出来,待用。
3楼2011-11-16 10:08:43
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