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HPLC2008木虫 (正式写手)
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[求助]
请问葡聚糖凝胶LH-20的使用!
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请问葡聚糖凝胶LH-20的使用!小弟首次使用,凝胶,请问可以用氯仿-甲醇混合溶剂冲吗?各种溶剂的凝胶柱分离化合物有没有什么优势,要注意些什么?请高手指点! 先谢过! |
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【答案】应助回帖
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qinhy(金币+1, PhEPI+1): 多谢回帖~ 2011-11-17 21:57:30
HPLC2008(金币+4): 谢谢！详细！ 2011-11-21 14:49:27
HPLC2008(金币+2): ★★★很有帮助 谢谢! 2012-01-19 00:08:11
qinhy(金币+1, PhEPI+1): 多谢回帖~ 2011-11-17 21:57:30
HPLC2008(金币+4): 谢谢！详细！ 2011-11-21 14:49:27
HPLC2008(金币+2): ★★★很有帮助 谢谢! 2012-01-19 00:08:11
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Sephadex LH20 洗脱溶剂 Sephadex LH20 洗脱溶剂因分为两类：反相和正相两种。用得最多的是反相溶剂洗脱，以甲醇－－水系统最为常见，先用水，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。正相系统以氯仿－－甲醇最为常见，先用50％氯仿－－甲醇，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。 样品的处理和洗脱溶剂的选择 如果样品极性大，这选用反相溶剂洗脱（甲醇－－水），样品用最少体积的甲醇－－水（尽可能甲醇少一些）溶解，过滤后，湿法上样（一定要滤喔！要是把Sephadex LH20 堵啦，就得将Sephadex LH20 的柱头部分弃去，很心痛呀）。如果样品极性小，这选用正相溶剂洗脱（氯仿－－甲醇），样品用最少体积的氯仿－－甲醇溶解，过滤后，湿法上样。 分离的技巧 （1） 流速不可太快，切切不可新急，所谓欲速则不达。 （2）柱子尽可能长， Sephadex LH20 柱长的增加将极大地改善分离，所不要吝惜填料，宁可将填料全装在一根大柱子中，不要将填料装成几根小柱。所谓集中优势兵力，打击敌人。 （3） 馏分一定要接的细，可1／10，或1／20 个保留体积接成一馏分。 （4） 洗脱体积一般为2-3个保留体积，对特殊保留强的化合物，可洗脱5个保留体积。 （5）鞣质成分死吸附严重，如不在乎填料者，可用Sephadex LH20 分鞣质 （6）Sephadex LH20 对黄酮类成分的分离效果极佳，方法很成型，有大量文献参考。 （7）填料反复使用，每次用完，一般可用甲醇将柱子洗干净，然后用下一次分离的起步溶剂将甲醇替换出来，待用。 |
3楼2011-11-16 10:08:43