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学学习唱唱歌

新虫 (初入文坛)


[交流] 急问,关于透析

我用1.5摩尔氯化钠提糖蛋白,(微波辅助),离心,之后4摄氏度透析的时候,透析袋里出现大量絮状沉淀,这到底是怎么回事啊?急问,求高人指点,多谢!
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jinpeng_6118

木虫 (正式写手)



学学习唱唱歌(金币+1):谢谢参与
学学习唱唱歌(金币+1): 2011-11-05 13:59:40
学学习唱唱歌(金币+5): 2011-11-05 14:00:06
你这么高的NaCL,透析要分步透析的,就是一次降低盐离子浓度,若你将这么高盐离子浓度的蛋白直接放入盐离子很低的透析液中,由于盐离子浓度急剧变化很容易产生沉淀的。
3楼2011-11-05 13:53:05
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jinpeng_6118

木虫 (正式写手)


打错字了,是依次逐渐降低透析液盐离子浓度
5楼2011-11-05 13:53:48
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学学习唱唱歌

新虫 (初入文坛)


引用回帖:
3楼: Originally posted by jinpeng_6118 at 2011-11-05 13:53:05:
你这么高的NaCL,透析要分步透析的,就是一次降低盐离子浓度,若你将这么高盐离子浓度的蛋白直接放入盐离子很低的透析液中,由于盐离子浓度急剧变化很容易产生沉淀的。

谢谢!能不能说的具体点,怎么逐步、依次降低盐离子浓度,什么步骤?多谢你了!
7楼2011-11-05 14:02:32
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随沙飞扬

金虫 (正式写手)


帮顶,祝福
8楼2011-11-05 14:11:48
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jinpeng_6118

木虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
学学习唱唱歌(金币+4): 多谢多谢!懂了! 2011-11-05 15:07:22
引用回帖:
7楼: Originally posted by 学学习唱唱歌 at 2011-11-05 14:02:32:
谢谢!能不能说的具体点,怎么逐步、依次降低盐离子浓度,什么步骤?多谢你了!

比如说你的蛋白溶液(透析袋内的)盐离子浓度是1.5M,那第一次透析时你的透析液盐离子浓度1.2或1.0M,透析3-5个小时(你得确定长时间在水溶液里你的蛋白不会怎么失活),第二次换透析液就降到0.8-0.5M,第三次换透析液再降低,直到最后透析液不加盐了。希望对你有帮助,要这样还产生沉淀,估计还有其他的因素因素的
9楼2011-11-05 14:15:46
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sz168

禁言 (著名写手)


学学习唱唱歌(金币+1):谢谢参与
本帖内容被屏蔽

10楼2011-11-05 15:41:04
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学学习唱唱歌

新虫 (初入文坛)


引用回帖:
9楼: Originally posted by jinpeng_6118 at 2011-11-05 14:15:46:
比如说你的蛋白溶液(透析袋内的)盐离子浓度是1.5M,那第一次透析时你的透析液盐离子浓度1.2或1.0M,透析3-5个小时(你得确定长时间在水溶液里你的蛋白不会怎么失活),第二次换透析液就降到0.8-0.5M,第三次换 ...

你好,我昨天做了梯度透析,效果一直很好,可是当我从0.4mol/L降至0.1mol/L的时候,透析袋内又出现了絮状沉淀,我都要疯了,我以为这个浓度差不大呢,已经快成功了却死在那了我都要自杀了!!!后来我没办法,死马当活马医,在透析液中加了一些氯化钠,使其浓度高于透析袋内浓度,想试试能不能反透析一下,结果效果不错,袋内的絮状沉淀消失了,可是我心里依然没底,这么来回折腾,我怕我要的东西都已经变性死翘翘了,万一这样一步错步步错,后面的分离工作就都变成无用功了。请帮我分析一下,我的这种补救措施有意义吗?袋内沉淀复溶会有问题吗?急切等待你的高见,谢谢了!
13楼2011-11-07 10:02:55
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jinpeng_6118

木虫 (正式写手)


引用回帖:
13楼: Originally posted by 学学习唱唱歌 at 2011-11-07 10:02:55:
你好,我昨天做了梯度透析,效果一直很好,可是当我从0.4mol/L降至0.1mol/L的时候,透析袋内又出现了絮状沉淀,我都要疯了,我以为这个浓度差不大呢,已经快成功了却死在那了我都要自杀了!!!后来我没办法,死 ...

你中间应该在加个梯度的,时间可以缩短些。我个人认为既然蛋白能重新溶解估计变性的可行性很小,我以前出现的沉淀就怎么也溶不了完全变性。我不知你的蛋白能不能直接做个简单的反应测活性,要是这样可以的话就可以一直监测活性变化。另外我的蛋白在透析过程中也不是很稳定,后来实验发现加入一定的有机溶剂可是它稳定,我就在透析液中添加了5%的乙醇,效果也很好的。
14楼2011-11-07 10:23:42
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学学习唱唱歌

新虫 (初入文坛)


引用回帖:
14楼: Originally posted by jinpeng_6118 at 2011-11-07 10:23:42:
你中间应该在加个梯度的,时间可以缩短些。我个人认为既然蛋白能重新溶解估计变性的可行性很小,我以前出现的沉淀就怎么也溶不了完全变性。我不知你的蛋白能不能直接做个简单的反应测活性,要是这样可以的话就可 ...

怎么最多只能给10个金币不能追加了呢?谢谢你了!比我有经验多了!新人,希望以后多多指教!
15楼2011-11-07 10:37:16
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mapa6752楼
2011-11-05 13:50   回复  
学学习唱唱歌(金币+1):谢谢参与
2011-11-05 13:53   回复  
学学习唱唱歌(金币+1):谢谢参与
epirsgis6楼
2011-11-05 13:54   回复  
学学习唱唱歌(金币+1):谢谢参与
weiwei511211楼
2011-11-05 16:00   回复  
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zjh75512楼
2011-11-05 16:34   回复  
学学习唱唱歌(金币+1):谢谢参与
2011-11-07 10:40   回复  
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