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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 天然药物化学 » 急问，关于透析
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学学习唱唱歌

新虫 (初入文坛)

[交流] 急问，关于透析

我用1.5摩尔氯化钠提糖蛋白，（微波辅助），离心，之后4摄氏度透析的时候，透析袋里出现大量絮状沉淀，这到底是怎么回事啊？急问，求高人指点，多谢！
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1楼 2011-11-05 13:46:00
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

jinpeng_6118

木虫 (正式写手)
★
学学习唱唱歌(金币+1):谢谢参与
学学习唱唱歌(金币+1): 2011-11-05 13:59:40
学学习唱唱歌(金币+5): 2011-11-05 14:00:06
你这么高的NaCL，透析要分步透析的，就是一次降低盐离子浓度，若你将这么高盐离子浓度的蛋白直接放入盐离子很低的透析液中，由于盐离子浓度急剧变化很容易产生沉淀的。
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3楼2011-11-05 13:53:05
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jinpeng_6118

木虫 (正式写手)
打错字了，是依次逐渐降低透析液盐离子浓度
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5楼2011-11-05 13:53:48
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学学习唱唱歌

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jinpeng_6118 at 2011-11-05 13:53:05:
你这么高的NaCL，透析要分步透析的，就是一次降低盐离子浓度，若你将这么高盐离子浓度的蛋白直接放入盐离子很低的透析液中，由于盐离子浓度急剧变化很容易产生沉淀的。

谢谢！能不能说的具体点，怎么逐步、依次降低盐离子浓度，什么步骤？多谢你了！
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7楼2011-11-05 14:02:32
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随沙飞扬

金虫 (正式写手)
帮顶，祝福
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8楼2011-11-05 14:11:48
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jinpeng_6118

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
学学习唱唱歌(金币+4): 多谢多谢！懂了！ 2011-11-05 15:07:22
引用回帖:
7楼: Originally posted by 学学习唱唱歌 at 2011-11-05 14:02:32:
谢谢！能不能说的具体点，怎么逐步、依次降低盐离子浓度，什么步骤？多谢你了！

比如说你的蛋白溶液（透析袋内的）盐离子浓度是1.5M，那第一次透析时你的透析液盐离子浓度1.2或1.0M，透析3-5个小时（你得确定长时间在水溶液里你的蛋白不会怎么失活），第二次换透析液就降到0.8-0.5M，第三次换透析液再降低，直到最后透析液不加盐了。希望对你有帮助，要这样还产生沉淀，估计还有其他的因素因素的
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9楼2011-11-05 14:15:46
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sz168

禁言 (著名写手)
★
学学习唱唱歌(金币+1):谢谢参与
本帖内容被屏蔽
10楼2011-11-05 15:41:04
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学学习唱唱歌

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by jinpeng_6118 at 2011-11-05 14:15:46:
比如说你的蛋白溶液（透析袋内的）盐离子浓度是1.5M，那第一次透析时你的透析液盐离子浓度1.2或1.0M，透析3-5个小时（你得确定长时间在水溶液里你的蛋白不会怎么失活），第二次换透析液就降到0.8-0.5M，第三次换 ...

你好，我昨天做了梯度透析，效果一直很好，可是当我从0.4mol/L降至0.1mol/L的时候，透析袋内又出现了絮状沉淀，我都要疯了，我以为这个浓度差不大呢，已经快成功了却死在那了我都要自杀了！！！后来我没办法，死马当活马医，在透析液中加了一些氯化钠，使其浓度高于透析袋内浓度，想试试能不能反透析一下，结果效果不错，袋内的絮状沉淀消失了，可是我心里依然没底，这么来回折腾，我怕我要的东西都已经变性死翘翘了，万一这样一步错步步错，后面的分离工作就都变成无用功了。请帮我分析一下，我的这种补救措施有意义吗？袋内沉淀复溶会有问题吗？急切等待你的高见，谢谢了！
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13楼2011-11-07 10:02:55
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jinpeng_6118

木虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 学学习唱唱歌 at 2011-11-07 10:02:55:
你好，我昨天做了梯度透析，效果一直很好，可是当我从0.4mol/L降至0.1mol/L的时候，透析袋内又出现了絮状沉淀，我都要疯了，我以为这个浓度差不大呢，已经快成功了却死在那了我都要自杀了！！！后来我没办法，死 ...

你中间应该在加个梯度的，时间可以缩短些。我个人认为既然蛋白能重新溶解估计变性的可行性很小，我以前出现的沉淀就怎么也溶不了完全变性。我不知你的蛋白能不能直接做个简单的反应测活性，要是这样可以的话就可以一直监测活性变化。另外我的蛋白在透析过程中也不是很稳定，后来实验发现加入一定的有机溶剂可是它稳定，我就在透析液中添加了5%的乙醇，效果也很好的。
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14楼2011-11-07 10:23:42
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学学习唱唱歌

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by jinpeng_6118 at 2011-11-07 10:23:42:
你中间应该在加个梯度的，时间可以缩短些。我个人认为既然蛋白能重新溶解估计变性的可行性很小，我以前出现的沉淀就怎么也溶不了完全变性。我不知你的蛋白能不能直接做个简单的反应测活性，要是这样可以的话就可 ...

怎么最多只能给10个金币不能追加了呢？谢谢你了！比我有经验多了！新人，希望以后多多指教！
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15楼2011-11-07 10:37:16
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mapa6752楼
2011-11-05 13:50   回复  
学学习唱唱歌(金币+1):谢谢参与
lijianhuiljh4楼
2011-11-05 13:53   回复  
学学习唱唱歌(金币+1):谢谢参与
epirsgis6楼
2011-11-05 13:54   回复  
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weiwei511211楼
2011-11-05 16:00   回复  
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zjh75512楼
2011-11-05 16:34   回复  
学学习唱唱歌(金币+1):谢谢参与
jinpeng_611816楼
2011-11-07 10:40   回复  
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