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急问,关于透析
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学学习唱唱歌
新虫
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[交流]
急问,关于透析
我用1.5摩尔氯化钠提糖蛋白,(微波辅助),离心,之后4摄氏度透析的时候,透析袋里出现大量絮状沉淀,这到底是怎么回事啊?急问,求高人指点,多谢!
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1楼
2011-11-05 13:46:00
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jinpeng_6118
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13楼
:
Originally posted by
学学习唱唱歌
at 2011-11-07 10:02:55:
你好,我昨天做了梯度透析,效果一直很好,可是当我从0.4mol/L降至0.1mol/L的时候,透析袋内又出现了絮状沉淀,我都要疯了,我以为这个浓度差不大呢,已经快成功了却死在那了我都要自杀了!!!后来我没办法,死 ...
你中间应该在加个梯度的,时间可以缩短些。我个人认为既然蛋白能重新溶解估计变性的可行性很小,我以前出现的沉淀就怎么也溶不了完全变性。我不知你的蛋白能不能直接做个简单的反应测活性,要是这样可以的话就可以一直监测活性变化。另外我的蛋白在透析过程中也不是很稳定,后来实验发现加入一定的有机溶剂可是它稳定,我就在透析液中添加了5%的乙醇,效果也很好的。
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14楼
2011-11-07 10:23:42
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jinpeng_6118
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学学习唱唱歌(金币
+1
):谢谢参与
学学习唱唱歌(金币+1): 2011-11-05 13:59:40
学学习唱唱歌(金币+5): 2011-11-05 14:00:06
你这么高的NaCL,透析要分步透析的,就是一次降低盐离子浓度,若你将这么高盐离子浓度的蛋白直接放入盐离子很低的透析液中,由于盐离子浓度急剧变化很容易产生沉淀的。
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3楼
2011-11-05 13:53:05
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jinpeng_6118
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打错字了,是依次逐渐降低透析液盐离子浓度
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5楼
2011-11-05 13:53:48
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3楼
:
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jinpeng_6118
at 2011-11-05 13:53:05:
你这么高的NaCL,透析要分步透析的,就是一次降低盐离子浓度,若你将这么高盐离子浓度的蛋白直接放入盐离子很低的透析液中,由于盐离子浓度急剧变化很容易产生沉淀的。
谢谢!能不能说的具体点,怎么逐步、依次降低盐离子浓度,什么步骤?多谢你了!
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7楼
2011-11-05 14:02:32
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