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水红蓝调

新虫 (小有名气)

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[求助] 如何测定培养基中的残糖含量

我在大肠杆菌的培养中用葡萄糖做碳源，然后想测定一下葡萄糖的残量，有没有相关童鞋测定过的？寻求比较简单方便的办法。。之前看的文献中的使用仪器都太复杂了。。。

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1楼2011-11-03 09:37:47

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z他山之石

银虫 (初入文坛)

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引用回帖:

3楼: Originally posted by jpp9898 at 2011-11-03 10:37:52
测定还原糖的标准方法是DNS法，需要的仅仅是DNS试剂（需要自己配制），一台水浴锅，一台紫外分光光度计！做标准曲线然后测定就行了！！

您好，我配的DNS试剂，加葡萄糖后没反应，颜色没变，能帮我分析下原因吗，我的具体步骤如下：
1.称取DNS（0.63g）加水50ml，水浴45度；
2.逐步加入氢氧化钠（0.21g）溶液，（26.2ml的2mol/L NaOH溶液，0.21g氢氧化钠溶于26.2ml水）同时不断搅拌，直到溶液清澈透明；（a.药品中的氢氧化钠要配制成溶液；直接加颗粒，可能产生鸡蛋花；b.加入氢氧化钠溶液时，溶液的温度会上升，所以要慢慢加，不停地搅拌，同时溶液的温度不能超过48度；温度高了，溶液颜色变黑。）
3.逐步加入四水酒石酸钾钠（18.5g）、苯酚（0.5g）和无水亚硫酸钠（0.5g）；（顺序最好不要更改！）
4.继续45度水浴，同时补水，不断搅拌，直到加入的物质完全溶解；（一定要有耐心地搅拌！） 5.停止加热，冷却至室温，用水定容至100ml。
6.烧结玻璃漏斗过滤（过滤与否，影响不大。）
7.储存在棕色瓶中，避光保存。室温下存放7天后使用
由于实验室没有蒸馏水，我用了去离子水代替，不知道有没有影响？？
然后用1mg/mL的葡萄糖溶液和DNS反应，可是颜色没有明显的变化，没有棕红色出现，下图1左1是用1mL的DNS和1mL的去离子水，左2是1mL的DNS和1mL的葡萄糖溶液反应，其他左3我又加了一点固体葡萄糖，左4我用麦芽糖和DNS反应，反应均在100摄氏度烘箱中烘了十分钟，，，可是颜色好像都没啥变化。。图2和图3是我在网上搜到的两个图，这个颜色差别就很明显。
上次用分光计测过，也没结果，峰不明显，而且峰值和葡萄糖浓度关系也不大。
想请教做过这个实验的虫友们，这个问题到底出在哪了。。求大家不吝赐教，谢谢！！

http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=9472910