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lcdshanshi

铁虫 (小有名气)

[求助] co-ip求救 已有1人参与

小弟现在在做co-ip实验，但是重复了n遍都得不到结果，如图所示，我用得是santa cruz的proteinA/G ,做的IP条带很特异也很亮，但是co-ip的条带就非常模糊，而且在可能出现的地方有拖带，每次都是这样，只有一次出现阳性结果，然后再也重复不出来了，简要步骤如下：

1. cells were lysed withNP40 lysis buffer (Beyotime)

2. precleared with 20 ul protein A/G agarose beads(1:10) coupled with mouse IgG for 2 h.Centrifugation at 2500rpm and transfer 300ul supernatant for co-ip, 100ul for NC.

3. Afer incubate with antibody and protein A/G,The beads were washed thrice with 1ml PBS

各位大神帮我看看，到底是咋回事应该怎样改动。谢谢。
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相聚在M
1楼 2011-11-02 14:16:35
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lcdshanshi

铁虫 (小有名气)
这方面的大虾都去哪里了，还是我错板块了。。。。。
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相聚在M
2楼2011-11-03 08:15:20
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lcdshanshi

铁虫 (小有名气)
求回复
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相聚在M
3楼2011-11-04 12:54:58
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allegory

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
4楼2011-11-04 14:12:47
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萝卜涨价了

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

出现这种情况可能是出现了非特异性的吸附，可以在混合液中先加入磁珠，以去除非特异性吸附的影响。另外，可能抗体浓度太高了，你试着降低抗体浓度看一下。
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5楼2018-05-04 09:32:31
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