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lcdshanshi铁虫 (小有名气)
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co-ip求救 已有1人参与
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小弟现在在做co-ip实验，但是重复了n遍都得不到结果，如图所示，我用得是santa cruz的proteinA/G ,做的IP条带很特异也很亮，但是co-ip的条带就非常模糊，而且在可能出现的地方有拖带，每次都是这样，只有一次出现阳性结果，然后再也重复不出来了，简要步骤如下： 1. cells were lysed withNP40 lysis buffer (Beyotime) 2. precleared with 20 ul protein A/G agarose beads(1:10) coupled with mouse IgG for 2 h.Centrifugation at 2500rpm and transfer 300ul supernatant for co-ip, 100ul for NC. 3. Afer incubate with antibody and protein A/G,The beads were washed thrice with 1ml PBS 各位大神帮我看看，到底是咋回事应该怎样改动。谢谢。  |
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