24小时热门版块排行榜    

查看: 1502  |  回复: 3

sunxuyan0608

铁虫 (初入文坛)

[求助] 请教一个关于BHK-21细胞瞬时转染的问题

各位大侠,我最近在做瞬时转染。用的是脂质体转染法,载体是pcDNA3.1,插入了一个干扰素的基因,用碱裂解法大量提取的质粒,OD260nm/280nm为1.9,应该很纯了。我转染了阳性质粒,同时转染了空载体做阴性对照,还有空细胞做阴性对照。
       转染两天后做间接免疫荧光,一抗为我自己做的多抗血清(阳性血清和阴性血清),二抗为商业化的荧光二抗,结果奇怪的是虽然我的阳性质粒出现了荧光,但是我的阴性血清对照,空载体阴性对照和空细胞阴性对照也都出现了荧光,而且荧光和阳性质粒一样明显。
       已经重复做了三次试验,结果都是这样的,而且更换过一抗和空载体,真的是找不出原因了。
      恳请大家帮忙!万分感谢!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小周

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

sunxuyan0608(金币+1): 谢谢您的建议! 2011-11-05 22:55:07
首先,转染时用的质粒应该是无内毒素的,建议买一个去内毒素的盒子重新制备质粒。不知道你的阳性质粒是什么?是GFP吗?GFP很好用,可以试一下。空载体和阴性出现荧光可能是质粒污染阳性质粒。
2楼2011-11-02 11:46:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linyingjia

至尊木虫 (职业作家)

你的转染用的质粒不合格    应该在1.8-1.85    用qiagen的大提试剂盒吧   效果不错
3楼2011-11-02 14:25:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Explor

新虫 (正式写手)

BIODAI的悬浮细胞试剂盒效果非常好,推荐
个性化基因研究、科研试剂、诊断试剂和实验服务
4楼2019-11-20 11:05:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sunxuyan0608 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 药学383 求调剂 +3 药学chy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 20:51 by 元子^0^
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-12 6/300 2026-03-16 15:05 by njzyff
[基金申请] NSFC申报书里申请人简历中代表性论著还需要在申报书最后的附件里面再上传一遍吗 20+5 NSFC2026我来了 2026-03-10 14/700 2026-03-15 23:53 by 不负韶华的虎
[考研] 274求调剂 +4 时间点 2026-03-13 4/200 2026-03-15 15:29 by Rambo13
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
[考研] 290求调剂 +4 @将就将就看 2026-03-10 8/400 2026-03-14 14:23 by 千千运气
[考研] 297求调剂 +4 学海漂泊 2026-03-13 4/200 2026-03-14 11:51 by 热情沙漠
[考研] 321求调剂 +3 CUcat 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:25 by JourneyLucky
[考研] 材料工程,326分,求调剂 +6 KRSLSR 2026-03-10 6/300 2026-03-13 23:47 by JourneyLucky
[考研] 341求调剂 +4 番茄头--- 2026-03-10 4/200 2026-03-13 23:12 by JourneyLucky
[考研] 285 求调剂 资源与环境 一志愿北京化工大学 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:04 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交大,材料专硕317求调剂 +5 lx8568 2026-03-11 5/250 2026-03-13 21:43 by peike
[考研] 四川大学085601材料工程专硕 初试294求调剂 +4 祝我们好在冬天 2026-03-11 4/200 2026-03-13 21:39 by peike
[考研] 【0856】化学工程(085602)313 分,本科学科评估A类院校化学工程与工艺,诚求调剂 +7 小刘快快上岸 2026-03-11 7/350 2026-03-13 16:06 by ruiyingmiao
[考研] 考研调剂 +4 芬达46 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:04 by ruiyingmiao
[考研] 290求调剂 +3 ADT 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:19 by peike
[考研] 工科0856专硕化学工程269能调剂吗 +10 我想读研11 2026-03-10 10/500 2026-03-13 10:14 by Yuyi.
[考博] 福州大学杨黄浩课题组招收2026年专业学位博士研究生,2026.03.20截止 +3 Xiangyu_ou 2026-03-12 3/150 2026-03-13 09:36 by duanwu655
[考研] 341求调剂 +4 捣蛋猪猪 2026-03-11 4/200 2026-03-12 14:47 by ruiyingmiao
[考研] 哈工大材料324求调剂 +6 闫旭东 2026-03-10 8/400 2026-03-10 22:49 by 星空星月
信息提示
请填处理意见