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sunxuyan0608

铁虫 (初入文坛)

[求助] 请教一个关于BHK-21细胞瞬时转染的问题

各位大侠,我最近在做瞬时转染。用的是脂质体转染法,载体是pcDNA3.1,插入了一个干扰素的基因,用碱裂解法大量提取的质粒,OD260nm/280nm为1.9,应该很纯了。我转染了阳性质粒,同时转染了空载体做阴性对照,还有空细胞做阴性对照。
       转染两天后做间接免疫荧光,一抗为我自己做的多抗血清(阳性血清和阴性血清),二抗为商业化的荧光二抗,结果奇怪的是虽然我的阳性质粒出现了荧光,但是我的阴性血清对照,空载体阴性对照和空细胞阴性对照也都出现了荧光,而且荧光和阳性质粒一样明显。
       已经重复做了三次试验,结果都是这样的,而且更换过一抗和空载体,真的是找不出原因了。
      恳请大家帮忙!万分感谢!
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小周

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

sunxuyan0608(金币+1): 谢谢您的建议! 2011-11-05 22:55:07
首先,转染时用的质粒应该是无内毒素的,建议买一个去内毒素的盒子重新制备质粒。不知道你的阳性质粒是什么?是GFP吗?GFP很好用,可以试一下。空载体和阴性出现荧光可能是质粒污染阳性质粒。
2楼2011-11-02 11:46:53
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