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sunxuyan0608

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
帖子: 9
在线: 2.9小时
虫号: 1185780
注册: 2011-01-08
专业: 兽医免疫学

[求助] 请教一个关于BHK-21细胞瞬时转染的问题

各位大侠，我最近在做瞬时转染。用的是脂质体转染法，载体是pcDNA3.1，插入了一个干扰素的基因，用碱裂解法大量提取的质粒，OD260nm/280nm为1.9，应该很纯了。我转染了阳性质粒，同时转染了空载体做阴性对照，还有空细胞做阴性对照。
转染两天后做间接免疫荧光，一抗为我自己做的多抗血清（阳性血清和阴性血清），二抗为商业化的荧光二抗，结果奇怪的是虽然我的阳性质粒出现了荧光，但是我的阴性血清对照，空载体阴性对照和空细胞阴性对照也都出现了荧光，而且荧光和阳性质粒一样明显。
已经重复做了三次试验，结果都是这样的，而且更换过一抗和空载体，真的是找不出原因了。

恳请大家帮忙！万分感谢！

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1楼 2011-11-02 10:39:59

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小周

铁杆木虫 (著名写手)

BioEPI: 2
应助: 42 (小学生)
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散金: 20
红花: 10
沙发: 1
帖子: 1329
在线: 561.4小时
虫号: 688224
注册: 2009-01-05
性别: MM
专业: 抗体工程学

【答案】应助回帖

sunxuyan0608(金币+1): 谢谢您的建议！ 2011-11-05 22:55:07

首先，转染时用的质粒应该是无内毒素的，建议买一个去内毒素的盒子重新制备质粒。不知道你的阳性质粒是什么？是GFP吗？GFP很好用，可以试一下。空载体和阴性出现荧光可能是质粒污染阳性质粒。

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2楼2011-11-02 11:46:53

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