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xyyy

木虫 (正式写手)

[求助] FDA染色前需要固定细胞吗

请教各位生物学大侠们:
我是刚接触细胞实验,最近在学习用FDA染色,然后荧光观察细胞在材料上的生长情况。
第一次就是直接加入染色剂,然后PBS漂洗了几次,直接拿出材料显微观察,可以看到细胞发绿光,但是细胞变圆了,有从材料上脱附的现象(如图)。
于是想是不是染色前需要固定一下,第二次就用多聚甲醛固定了,然后染色,漂洗后观察时却看不到荧光了,更没有细胞,不知道怎么回事。是不是染活细胞的FDA遇到固定后的细胞失去作用了?还是固定剂选的不对呢?
费解!求解!
不甚感激!
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xyyy

木虫 (正式写手)

why就没有人回复呢?难道生物大侠们都不愿意回答我的几乎菜鸟级的问题?还是我没说明白?抑或。。。。
2楼2011-11-03 21:38:26
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xufalun

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流~ 2011-11-04 16:25:14
xyyy(金币+1): 还是谢谢 2011-11-16 16:42:55
fda是在活细胞内,才能被酶分解为可以产生荧光的物质。你加的固定剂把细胞都杀死了,当然没荧光啦,况且细胞不需要固定。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2011-11-03 22:28:05
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xyyy

木虫 (正式写手)

送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by xufalun at 2011-11-03 22:28:05:
fda是在活细胞内,才能被酶分解为可以产生荧光的物质。你加的固定剂把细胞都杀死了,当然没荧光啦,况且细胞不需要固定。

那请问为什么没有铺展呢?是圆的细胞,不是那种。。。U know?还有就是有点测试细胞室需要固定的,比如做sem。
4楼2011-11-05 11:38:52
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达达米happy

新虫 (初入文坛)

应该是不用固定的,不过我不固定用激光共聚焦做出来也不好看。。。
5楼2012-09-10 13:25:04
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狼250

新虫 (初入文坛)

你好,我刚接触细胞实验,想咨询一下用FDA染色法时,加入FDA染液之后细胞要培养多长时间才可以检测?
6楼2015-04-21 13:43:07
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